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TSA对水牛体细胞增殖及核移植胚胎发育影响的研究
中文名称: TSA对水牛体细胞增殖及核移植胚胎发育影响的研究
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论文编号: 3806083收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Effects of Trichostatin a on the Proliferation of Buffalo Somatic Cells and Development of Nuclear Transfer Embryos
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 动物遗传育种与繁殖
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 水牛 TSA Cx43 体细胞核移植 早期胚胎发育 细胞增殖 胚胎发育
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对水牛成纤维细胞增殖和Cx43基因表达的影响。传代培养六代的水牛成纤维细胞用不同浓度的TSA处理不同时间,采用MTT法对水牛成纤维细胞增殖情况进行检测,并用实时荧光定量PCR技术对水牛成纤维细胞的Cx43mRNA变化情况进行检测。结果发现,TSA处理对水牛成纤维细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间、浓度依赖性;适宜浓度TSA处理水牛成纤维细胞一定时间可以显著提高Cx43基因的表达水平,且随处理浓度、时间的不同出现动态变化,当TSA处理时间为48h,处理浓度为0.1、0.5、1μmol/L时,Cx43 tuRNA的表达量分别约是对照组的7倍、9倍、11倍,显著高于对照组(P<0.05)。 探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理水牛体细胞核移植胚胎对其随后发育能力的影响。用不同浓度的TSA(0 nmol/L、5 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L)处理核移植重构胚10h,各组间的核移植胚胎分裂率无显著差异(P>0.05),当TSA处理浓度为50 nmol/L时,重构胚的囊胚发育率显著高于对照组(22.0%Vs 13.0%,P<0.05)。浓度为50 nmol/L的TSA处理核移植重构胚不同时间(0、10、24、36、48h),核移植胚胎的分裂率各组间无显著差异(P>0.05);但TSA处理时间为10、24、36、48h的处理组其囊胚发育率均显著高于对照组(P<0.05),然而各处理组之间囊胚率并无显著差异(P>0.05),其中TSA处理时间为24h组重构胚的囊胚发育率较高(26.4%)。结果显示,50nmol/L的TSA处理水牛体细胞核移植重构胚24h,能显著提高水牛体细胞核移植效果。 采用免疫荧光染色技术测定了间隙连接蛋白Cx43在水牛体外受精(IVF)胚胎和体细胞核移植(SCNT)胚胎早期发育过程中的表达模式。结果发现,Cx43蛋白在胚胎发育的各个时期均有表达,其中在2、4、8细胞期,Cx43蛋白在两种类型胚胎的卵裂球中均有大量表达,而在桑椹胚和囊胚期,Cx43蛋白的表达明显减弱,且体细胞核移植胚胎中Cx43蛋白的表达明显弱于同时期的体外受精胚胎。 以上研究结果表明:⒈TSA处理对水牛成纤维细胞增殖有抑制作用,并呈时间、浓度依赖性;⒉适宜浓度TSA处理水牛成纤维细胞一定时间可以显著提高Cx43基因的表达水平;⒊适宜浓度的TSA处理水牛体细胞核移植重构胚一定时间可以提高其胚胎发育能力;⒋Cx43蛋白在早期胚胎发育中起着重要的作用,水牛核移植胚胎的Cx43蛋白表达量低可能是其发育潜能较低的主要原因。
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