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SSA抗原的克隆表达及其抗体检测方法的建立
中文名称: SSA抗原的克隆表达及其抗体检测方法的建立
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论文编号: 3805880收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning and Expression of SSA Antigen and Establishing Method for Detecting Anti-SSA
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 免疫学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: SSA抗原 真核表达 SSA抗体 斑点免疫金渗滤法 克隆表达 抗原纯化 白血病
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:【目的】 构建pPIC9k-SSA重组质粒,采用巴斯德毕赤酵母SMD1168表达系统表达SSA蛋白,对表达的蛋白产物进行纯化,并对SSA的抗原性质进行研究,建立相关的方法学检测。 【方法】 1.分离、培养人白血病淋巴细胞HL-60株,提取其RNA,以RNA为模板,通过反转录得到cDNA,再以cDNA为模板扩增出SSA基因。 2.将SSA基因转入pPIC9k质粒构建pPIC9k-SSA重组质粒,并将重组质粒电转化导入毕赤酵母菌SMD1168真核表达系统进行诱导表达,对产物进行初步纯化。 3.将获得的SSA蛋白作为抗原,建立免疫斑点金渗虑法检测抗SSA抗体,以期为临床提供常规检测项目。 4.对获得的SSA蛋白进行相关的抗原性研究。 5.收集经ENA抗体谱检测抗SSA抗体阳性的SS病人血清作为阳性对照,收集经ENA抗体谱检测全阴性的健康体检者血清作为阴性对照,用于验证所建立的斑点免疫金渗虑法的敏感性、特异性及稳定性等。 【结果】 1.从人白血病cDNA文库中扩增出人SSA基因,成功构建pPIC9k-SSA重组质粒。 2.将pPIC9k-SSA重组质粒导入毕赤酵母菌SMD1168真核表达系统中,获得稳定整合目的基因的菌株。 3.重组菌株经诱导表达出产物相对分子量约为50 kDa的SSA蛋白,可与抗SSA抗体特异性结合。 4.建立检测SSA抗体的斑点免疫金渗虑法方法。 【结论】 本实验室通过分子克隆技术,从毕赤酵母菌SMD1168真核表达系统中获得了人SSA抗原,应用初步纯化的真核表达产物(抗原)建立DIGFA法检测抗SSA抗体,敏感性和特异性与IB法相近,由于受到抗原纯化技术、样本数量、时间等的限制,本法的特异性、试剂的稳定性等有待进一步研究,但本法具有简便、快速和经济等优点,待进一步完善后值得在临床上的推广应用。
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