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血管紧张素受体阻断剂替米沙坦、厄贝沙坦具有激活PPARα/γ的作用
中文名称: 血管紧张素受体阻断剂替米沙坦、厄贝沙坦具有激活PPARα/γ的作用
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论文编号: 3767502收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Angiotensin Type 1 Receptor Blockers Telmisartan and Irbesartan Increase the Express of Peroxisome Proliferator Activated Receptor Alpha/gamma Gene
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 内科学内分泌及代谢病学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 过氧化酶体增殖物激活受体γ 过氧化酶体增殖物激活受体α 替米沙坦 厄贝沙坦 糖脂代谢 血管紧张素受体阻断剂 物激活受体α
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论文简介:目的:本研究通过观察血管紧张素受体阻断剂(angiotensin type1 receptorblockers,ARB)替米沙坦、厄贝沙坦对过氧化酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator activated receptor gamma,PPARγ)及过氧化酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor alpha,PPARα)的作用以探讨其改善糖脂代谢的机制。 方法:⒈将构建的PPARγ或PPARα编码蛋白质DNA片断的全长表达质粒、过氧物酶体增生因子反应元件(peroxisome proliferatots response elements,PPREs)调控的荧光素酶的表达质粒与pRL表达载体及内质控pRL-TK应用脂质体(SuperFect)瞬时转染COS-7细胞,24小时后分别加入不同剂量的吡格列酮(PGZ)或非诺贝特及缬沙坦、氯沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦、PPARγ特异性阻断剂GW9662,继续孵育12、24、36、48、60小时,应用双荧光素酶基因报告检测系统检测荧光素酶活性以反映PPARγ或PPARα表达活性。⒉将构建的PPRE调控的荧光素酶的表达质粒与pRL表达载体应用脂质体(SuperFect)稳定转染后的3T3-L1前脂肪细胞,经诱导分化成为成熟的脂肪细胞,24小时后加入不同浓度的吡格列酮及替米沙坦、厄贝沙坦、PPARγ特异性阻断剂GW9662,继续孵育6、12、18、24、30小时,应用双荧光素酶基因报告检测系统检测荧光素酶活性以反映PPARs表达活性。⒊在分化的3T3-L1脂肪细胞中,分别加入不同浓度的替米沙坦、厄贝沙坦,刺激24小时后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PPARγmRNA、PPARαmRNA的表达,用Western blot杂交方法检测PPARα蛋白质的表达。 结果:⒈在转染后的COS-7细胞中,PGZ呈剂量及时间依存性地增加PPARY荧光素酶活性,PGZ10-5mol/L达到最高值,为对照组的7.7倍(16.85±4.28vs2.10±0.18,P<0.01)。缬沙坦、氯沙坦不能增加PPARγ荧光素酶活性;替米沙坦和厄贝沙坦均呈剂量和作用时间依赖性地增加PPARγ荧光素酶活性,两者在10-4mol/L浓度作用48h时分别刺激PPRE调控的荧光素酶活性较对照组增高11倍(47.78±11.76 vs4.33±0.45,P<0.01)和9.9倍(43.27±13.02 vs4.33±0.45,P<0.01),这种刺激作用在48h达到高峰。⒉在转染后的COS-7细胞中,非诺贝特呈剂量及时间依存性地增加PPARα荧光素酶活性,非诺贝特10-4mol/L达到最高值,为对照组的4.1倍(40.50±5.61 vs9.88±1.67,P< 导分化的3T3-L1脂肪细胞,厄贝沙坦及替米沙坦激活PPARs的作用可被GW9662部分抑制。⒋替米沙坦、厄贝沙坦均呈剂量依赖性地增强分化的3T3-L1脂肪细胞PPARγmRNA、PPARαmRNA及蛋白的表达。 结论:⒈成功地进行了PPARγ、PPARα、PPRE质粒的扩增与提取,构建具有较高敏感性的PPARs表达筛选系统。⒉利用该筛选系统明确替米沙坦和厄贝沙坦具有增加PPARγ及PPARα转录活性的作用,且激活PPARα的作用是独立于激活PPARγ之外。说明替米沙坦、厄贝沙坦可能通过同时激活PPARγ、PPARα来改善T2DM患者糖脂代谢。
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