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内皮素受体A(ETRA)和降钙素基因相关肽在兔SAH脑血管的表达与新型ETRA拮抗剂的设计合成及其生物活性研究
中文名称: 内皮素受体A(ETRA)和降钙素基因相关肽在兔SAH脑血管的表达与新型ETRA拮抗剂的设计合成及其生物活性研究
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论文编号: 3767423收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Expressions of Endothelin A Receptor and Calcitonin Gene-Related Peptide in Brain Vessel after Subarachnoid Hemorrhage in Rabbits with the Synthesis and Bioactive Study of the Novel Endothelin A Receptor Antagonists
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 微生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 蛛网膜下腔出血 脑血管痉挛 降钙素基因相关肽 内皮素受体A 内皮素受体拮抗剂 内皮素 受体
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论文简介:⒈探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管内皮素受体A(ETRA)及降钙素基因相关肽(CGRP)的表达,以及二者与迟发性脑血管痉挛(DCVS)之间的关系。⒉探索设计、合成新型多肽类选择性ETRA拮抗剂的方法,通过对合成和纯化过程中关键步骤及参数的比较,为固相合成多肽类选择性ETRA拮抗剂提供一条简单、可行的途径。并在实验性SAH活体模型观察新型多肽的生物活性。 研究方法: ⒈根据内皮素.1(ET-1)的构效关系,应用随机噬菌体肽库筛选技术,结合lasergene等计算机软件辅助设计,经过对目标序列的系统结构分析,最终确定筛选设计出5条新型内皮素受体A拮抗六肽;然后应用固相合成方法,并采用质谱检测及反相高效液相色谱纯化策略,对这5种新型六肽进行分离纯化;最后在兔实验性SAH模型活体观察其对脑血管痉挛的拮抗作用。⒉将日本大耳白家兔290只进行随机分组:其中空白对照组35只,假手术对照组35只,盐水对照组35只, SAH模型组35只,新型六肽ETRA拮抗剂组150只。实验各组内又根据不同的时间段分为5个亚组,分别为造模后1 h、3 d、5 d、7 d、lO d组,每亚组中5做ETRA与CGRP免疫组织化学染色,2只做脑血管超微结构研究:其中ETRA拮抗剂组内又分为标准拮抗剂(BQ.485)对照组、SC-01拮抗剂组、SC-02拮抗剂组、SC-03拮抗剂组、SC-04拮抗剂组、SC-05拮抗剂组共6个亚组,每亚组5只兔。 ⒊采用枕大池二次注血法制作SAH模型,灌注处死后取基底动脉制成切片。使用SABC免疫组织化学染色和HE染色光镜,以及电子显微镜,观察基底动脉ETRA与CGRP的表达和病理结构变化,并用图像分析方法测量血管周长,观察新型ETRA拮抗剂对脑血管痉挛的拮抗作用,使用方差分析进行统计学检验。实验结果: ⒈基底动脉周长在SAH后均发生明显缩窄,其中在5 d时缩小最强烈;SAH可导致脑血管超微结构会发生损害,并在病程发展中呈明显的动态改变。 ⒉ETRA在正常组、穿刺组和盐水组的基底动脉内有少量表达;SAH组基底动脉内ETRA的表达在3 d组和5 d组表现为高表达,其中以3 d组最强烈,其中血管内皮细胞表达最强烈,平滑肌也有表达,lO d组的表达强度仍然较重。 ⒊CGRP在穿刺组、正常对照组和盐水组的基底动脉内也有散在不规则表达。在SAH组基底动脉内CGRP表达的动态变化规律为,CGRP的表达在1 h时最明显,在3 d、5 d依次表达减少,5 d达到最低点,7 d后开始逐渐升高,10 d时表达相对比较明显,但未能达到正常水平。 ⒋在合成的5种新型六肽类选择性ETRA拮抗剂中,SC-01拮抗剂的效果明显好于标准拮抗剂(BQ-485)对照组和其他拮抗剂(P<0.05),SC.05拮抗剂的效果仅次于SC-01(P<0.05),SC-02,SC-03,SC-04拮抗剂与标准拮抗剂之间没有明显的差别P>0.05)。SC-01与SC-05拮抗剂对蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛有明显的缓解作用。 结论: ⒈SAH后脑血管CGRP和ETRA表达呈现明显的动态改变,但二者的变化趋势并不同步;CGRP和ETRA在DCVS的发生发展中起重要的作用。 ⒉新型六肽类选择性ETRA.拮抗剂SC-01与SC-05可以有效地缓解蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛。
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