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西多福韦对人乳头瘤病毒感染的宫颈癌细胞生长抑制作用的研究
中文名称: 西多福韦对人乳头瘤病毒感染的宫颈癌细胞生长抑制作用的研究
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论文编号: 3767407收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Growth Suppression of Human Papillomavirus Positive of Cervical Cancer Cells by Cidofovir
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 妇产科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 人乳头瘤病毒 西多福韦 Hela细胞 Siha细胞 肿瘤模型 人乳头瘤病毒感染 宫颈癌细胞
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论文简介:目的:研究我国宫颈癌(cervical carcinoma,CC)及癌前病变中人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的现状及其型别特征;探讨西多福韦(Cidofovir,CDV)对HPV感染的宫颈癌Hela细胞和Siha细胞增殖生长的抑制作用,以评价西多福韦抗HPV感染和抗肿瘤的应用价值。 方法: 1.临床研究:⑴回顾性分析690例患者的HPV检测、宫颈细胞学及阴道镜下宫颈组织病理学检查结果。其中,细胞学检查应用TCT法(Thinprepcytology test),高危型HPV检测应用第二代杂交捕获实验(Hybrid CaptureⅡ,HCⅡ)。⑵回顾性分析153例宫颈癌及癌前病变的石蜡包埋组织标本,提取组织中DNA,应用基因芯片技术检测HPV亚型。 2.体外研究:⑴应用MTT比色法和集落形成试验,测定西多福韦作用前后Hela细胞和Siha细胞的活性;⑺应用实时定量PCR法,观察西多福韦对Hela细胞中HPV18 E6、E7 mRNA和Siha细胞中HPV16 E6、E7 mRNA表达的影响:⑶应用Western-blot法,观察西多福韦用药前后Hela细胞和Siha细胞中p53、Rb等抑癌基因的表达;⑷应用流式细胞仪,检测西多福韦对Hela细胞和Siha细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响;⑸应用TRAP-ELISA法,检测西多福韦用药前后Hela细胞和Siha细胞端粒酶的活性。 3.体内研究:应用Hela细胞和Siha细胞分别建立裸鼠人宫颈癌模型(2×106个细胞/只)。肿瘤形成后,随机将裸鼠各分为3组,分别在瘤内注射PBS、2.5mg/ml西多福韦(0.25mg/次)和5.0mg/ml西多福韦(0.5mg/次),3次/周,共3周。⑴通过比较肿瘤体积和重量,观察西多福韦对裸鼠肿瘤生长的抑制作用;⑵应用Western-blot法,观察西多福韦用药前后肿瘤中p53蛋白的表达;⑶应用免疫组织化学法检测各组肿瘤切片中PCNA抗原的表达,同时应用TUNEL技术检测西多福韦对细胞凋亡的影响。 结果: 1.临床研究:⑴宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia.CIN)Ⅱ/Ⅲ和浸润癌患者的高危型HPV阳性率均在90.00%以上,且细胞学、病理学级别越高,高危型HPV感染率越高;⑵HPV负荷量越高,宫颈病变程度越严重;⑶宫颈病变程度不同,其感染的HPV亚型亦有所不同,其中HPV16是主要的致病亚型;⑷HPV混合感染率随着宫颈病变病理学级别的增高而增加。 2.体外研究:⑴MTT比色法和集落形成试验结果显示,西多福韦能明显抑制Hela细胞和Siha细胞的增殖活性,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);⑵实时定量PCR结果证实,西多福韦能明显降低Hela细胞中HPV18 E6、E7和Siha细胞中HPV16 E6、E7 mRNA的表达;⑶西多福韦可使Hela细胞和Siha细胞中p53蛋白的表达增高,且具有剂量依赖关系,还可使细胞中非磷酸化Rb蛋白产物增加,磷酸化Rb蛋白产物降低;⑷西多福韦能使Hela细胞和Siha细胞阻滞于细胞周期的S期和G1期;⑸与对照组比较,西多福韦能明显抑制Hela细胞和Siha细胞的端粒酶活性(P<0.01)。 3.体内研究:⑴西多福韦能明显抑制接种了Hela细胞和Siha细胞的裸鼠肿瘤的体积和重量,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);⑵Western-blot结果显示,西多福韦能增加裸鼠肿瘤中p53蛋白的表达;⑶西多福韦还可使肿瘤中PCNA的表达降低,诱导肿瘤细胞凋亡。 结论:高危型HPV感染是宫颈癌的根本致病因素,清除HPV感染是预防宫颈癌发生的关键。西多福韦对HPV感染的宫颈癌Hela细胞和Siha细胞及其荷瘤裸鼠肿瘤的增殖生长具有明显的抑制作用,并能诱导细胞凋亡。
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