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慢性乙型肝炎治疗型MVA载体疫苗的基础研究
中文名称: 慢性乙型肝炎治疗型MVA载体疫苗的基础研究
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论文编号: 3767268收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Preliminary Study on Hepatitis B Theraputic MVA Vector Vaccine
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 内科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 乙型肝炎 治疗型疫苗 异源性载体 慢性乙型肝炎 MVA 载体疫苗 DNA疫苗
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:由于DNA疫苗在诱导机体特异性细胞免疫方面具有独特优势,已作为针对慢性乙型肝炎具有潜力的免疫治疗手段被广泛研究。如何加强DNA疫苗的效果是推动DNA疫苗发展的关键。其中一个研究方向就是通过选择佐剂和调整免疫程序加强DNA疫苗的保护效率。 异源性载体prime/boost免疫策略是利用不同性质的载体表达同一个保护抗原,一般是DNA疫苗初次免疫(prime),然后用病毒载体加强(boost)。DNA疫苗抗原纯度高,持续表达低剂量的抗原,可多次重复免疫以及诱导高效价记忆性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,是理想的用于初次免疫的疫苗;重组病毒能高效表达目的抗原,模拟病毒感染诱导机体免疫的天然过程,能诱发多种细胞因子,而且有利于高亲和性抗体和T细胞受体的选择,可以有效地产生Th1型和CTL反应。 白细胞介素18(IL-18)最早被称为IFN-γ诱导因子γ,它不仅能促进T细胞和NK细胞产生IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子,并能增强Th1细胞和NK细胞表达Fas配体,从而介导细胞毒作用。 本课题在构建含HBV不同抗原基因的重组MVA假病毒颗粒的基础上,采取DNA prime/VLP boost的免疫程序,辅以细胞因子IL-18作为佐剂,评价其治疗HBV慢性感染的可能价值。 首先将表达乙型肝炎病毒PreS2-S、C、PreC/C等抗原基因,以及分别突变2个和4个核苷酸的PreC/C基因分别克隆入与痘苗病毒Ankara株(MVA)基因组同源的穿梭载体pSC11中,构建并筛选重组质粒,将所得转染MVA病毒经过9次传代培养,筛选分别携带这些目的基因的重组MVA病毒,通过PCR扩增证实重组病毒分别正确携带目的基因,并且在传代过程中成功形成单克隆,间接免疫荧光鉴定重组病毒可以被所表达抗原的特异性抗体识别,证实重组病毒正确表达目的抗原并具有良好的抗原性。 大量制备DNA疫苗、重组病毒以及鼠白细胞介素-18(mIL-18)质粒,分别采用DNA疫苗单独免疫、rMVA单独免疫、DNA prime/rMVA boost、DNA prime/rMVAboost+mIL-18的免疫程序免疫C57BL/6小鼠,采用ELISA、ELISPOT方法评价体液免疫和细胞免疫的效果。结果显示,表达PreS2-S、C两种抗原的各组疫苗在抗体产生的时间和滴度方面均没有统计学差异,用ELISPOT检测IFN-γ的产生可知,所有免疫组均可引起针对特异性抗原的细胞免疫,rMVA单独免疫组强于DNA疫苗单独免疫组,弱于DNA prime/rMVA boost和DNA prime/rMVAboost+mIL-18组,DNA prime/rMVA boost和DNA prime/rMVA boost+mIL-18之间没有显著差别。 研究表明,携带HBV保护性抗原基因的重组MVA病毒可以诱导针对抗原的特异性细胞免疫和体液免疫,将其与表达相同抗原的DNA疫苗联合,采用DNAprime/rMVA boost的免疫方案,可以诱导比两者单独应用更强的细胞免疫反应,实验结果将为治疗型HBV疫苗的应用研究提供科学依据。
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