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家蚕脂联素受体鉴定、亚细胞定位以及组织表达分析
中文名称: 家蚕脂联素受体鉴定、亚细胞定位以及组织表达分析
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论文编号: 3730627收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning, Subcellular Localization, and Analysis of Tissue Expression of Bombyx Mori Adiponectin Receptor
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 家蚕 脂联素受体 电子克隆 生物信息学分析 亚细胞定位 荧光定量PCR BmNPV
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:本文通过生物信息学的方法电子克隆得到家蚕脂联素受体(BmAdipoR)基因,并运用相关的生物信息学软件对其进行了分析。利用家蚕杆状病毒表达系统对该基因作了表达,并分析了该基因的亚细胞定位。运用荧光定量PCR方法研究了BmAdipoR在家蚕中肠、脂肪体、血淋巴、马氏管等各个组织中的表达情况,并研究了添毒(BmNPV)后该基因在家蚕感性(306)品系中肠中的表达情况。 1.利用电子克隆方法首次从家蚕EST数据库中克隆得到家蚕脂联素受体(BmAdipoR)全长基因(GenBank登录号:EF062308)并用实验方法验证了该基因。用生物信息学分析BmAdipoR的跨膜结构域,结果表明该受体含有7次跨膜结构,且N端在细胞内,C端在细胞外。进化树分析表明BmAdipoR在进化上与其它物种脂联素受体具有高度同源性。 2.根据电子克隆得到的BmAdipoR cDNA序列设计引物扩增出了其编码序列,将基因克隆到杆状病毒转座载体pFastBacHTb的Xhol Ⅰ和Xba Ⅰ位点中,成功构建了pFastBactHTb-BmAdipoR-EGFP重组转移载体。转化至受体菌DH10Bac后,PCR证明BInAdipoR-EGFP已成功发生转座。获得的重组Bacmid-BmAdipoR-EGFP转染家蚕细胞后,得到了重组病毒vBm-BmAdipoR-EGFP。Olympus共聚焦显微镜下观察结果表明,BmAdipoR定位在细胞膜上。 3.根据电子克隆得到的BmAdipoR cDNA序列设计引物,运用荧光定量PCR方法研究了BmAdipoR在家蚕中肠、脂肪体、血淋巴、马氏管、卵巢、精巢和丝腺组织中的表达情况,并研究了添毒(BmNPV)后该基因在家蚕感性(306)品系中肠中的表达情况。结果表明:BmAdipoR在马氏管、脂肪体和精巢中表达量较高,其次依次是卵巢、血液、丝腺和中肠。感染BmNPV病毒48d小时,BmAdipoR在306中肠中的表达量没有明显变化,但在72小时后,表达量明显升高。
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