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通心络超微粉剂对ET-1诱发兔冠状动脉痉挛后血管NF-κB、iNOS等因子的影响
中文名称: 通心络超微粉剂对ET-1诱发兔冠状动脉痉挛后血管NF-κB、iNOS等因子的影响
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论文编号: 3730200收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Effects of Tongxinluo Supermicropowder on NF-κB、iNOS Expression in Artery of Rabbits after Coronary Spasm Induced by ET-1
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 内科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 通心络 冠状动脉痉挛 核因子-kappaB(NF-κB) 诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 一氧化氮(NO) 动物模型 心肌损伤
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论文简介:目的: 应用通心络超微粉剂干预实验动物日本大耳白兔5天后,用内皮素-1(ET-1)静脉注射建立冠状动脉痉挛模型,检测各组实验动物冠状动脉血管中核因子-kappaB(NF-kB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)等因子的表达,观察通心络超微粉剂对血管NF-kB、iNOS等表达的影响,探讨通心络超微粉剂缓解冠状动脉痉挛的可能机制。 方法: 1、实验动物分组将雄性日本大耳白兔30只随机分为5组(每组6只),分别为: ⒈对照组(生理盐水组,10ml/day),⒉通心络超微粉剂(TXL)低剂量组(150mg/kg/day),⒊通心络超微粉剂中剂量组(300mg/kg/day),⒋通心络超微粉剂高剂量组(600mg/kg/day),⒌地尔硫卓组(10mg/kg/day)。 以上药物均用10ml生理盐水溶解后通过灌胃方法给药5天,每日一次。 2、动物模型建立各组实验动物于试验前一天晚开始禁食18小时,可自由进水。ET-1注射前30分种给予相应干预药物灌胃。ET-1注射前15min腹腔内注射乌拉坦(1000mg/Kg/10ml)麻醉兔后将兔俯卧固定于兔手术台上,连接体表心电图。试验开始后通过兔耳缘静脉弹丸式注射ET-1(1.4 nmol/kg)诱发冠状动脉痉挛,连续描记标准肢体Ⅱ导联心电图,观察心电图T波改变。 3、血清学标本留取于ET-1注射前及注射后2h、6h分别于耳缘静脉取血5ml,静置待凝,3000rpm离心后,分离血清置入1.5ml EP管待用。 4、动物处死,留取组织标本ET-1注射后6h,静脉注射肝素300IU/Kg,两min后颈动脉放血后固定于解剖台,开胸,断肋,暴露心包,迅速取出心脏、分离出冠状动脉,4℃肝素生理盐水冲洗后,分别置于液氮中保存。 5、各项指标检测 ⒈心电图T波高度改变:应用Medlab6.0系统自动测量ET-1注射前及注射后3、5、15、30min描记的心电图标准肢体导联T波高度,取平均值。数值以百分数形式体现,表示T-波升高值占应用ET-1前的高度值的百分比。 ⒉血清心肌坏死标志物(TnI)含量测定:取:ET-1注射前及注射后0.5h、2h、6h的血清标本,用兔血清肌钙蛋白I检测试剂盒(96孔板,ELLISA法)检测血清TnI浓度。 ⒊冠状动脉NF-kB及iNOS表达检测:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定冠状动脉血管中iNOS及NF-kB表达,测定各组目的条带的平均灰度积分值(产物的面积×产物的平均灰度),并以β-actin作为内参照,计算目的条带的相对灰度积分值。 ⒋冠状动脉NF-kB活性检测:用NF-kB活性检测试剂盒(96孔板,ELISA法)测定各组冠状动脉NF-kB活性,比较各组血管NF-kB活性的差异。 6、统计分析方法 计量资料以均数±标准差(-x±s)表示。多组计量资料均数差别的比较运用单因素方差分析,组间比较方差齐时用LSD检验,方差不齐时用Dunnett's T3检验,两样本均数比较用t检验。显著性水平P值界限定为0.05。各统计资料均用SPSS13.0统计软件处理。 结果: 1、冠状动脉痉挛前后T波高度改变于ET-1注射后5min最明显。TXL中剂量组,TXL高剂量组和地尔硫卓组用药后5min和10min与对照组相比,T波高度改变有显著性差异(P<0.05),TXL低剂量组的T波高度改变与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。TXL高剂量组在ET-1注射后5min的T波高度改变与地尔硫卓组相比有显著性差异(P<0.05),TXL中剂量组与地尔硫卓组相比无显著性差异(P>0.05)。 2、各组实验动物血清TnI于ET-1注射后2小时即升高,此时仅TXL中剂量组和TXL高剂量组血清TnI与基线比无显著性差异(P>0.05),对照组、TXL低剂量组和地尔硫卓组血清TnI水平与基线相比均显著升高(P<0.05),而在ET-1注射后6小时,仅TXL高剂量组血清TnI与基线比无显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,ET-1注射后6小时TXL中剂量组,TXL高剂量组和地尔硫卓组血清TnI差异显著(P<0.05),TXL低剂量组无明显差异(P>0.05)。ET-1注射后6小时,TXL高剂量组血清TnI与地尔硫卓组相比有显著性差异(P<0.05)。 3、冠状动脉NF-kB RT-PCR结果显示对照组NF-kB的表达条带最亮,TXL低剂量组和地尔硫卓组次之,TXL中剂量组和TXL高剂量组最暗。 4、冠状动脉iNOS RT-PCR结果显示对照组iNOS的表达条带最亮,TXL低剂量组和地尔硫卓组次之,TXL中剂量组和TXL高剂量组最暗。 5、与对照组相比,TXL高剂量组冠状动脉NF-kB活性有显著性差异(P<0.05),TXL低剂量组、TXL中剂量组和地尔硫卓组无显著性差异(P>0.05)。 结论: 1、通过用ET-1耳缘静脉注射能成功建立兔冠状动脉痉挛模型。 2、通心络超微粉剂的应用能够降低冠状动脉痉挛时心电图T波的升高,降低血清心肌损伤标志物TnI的水平,从而说明通心络超微粉剂能减轻冠状动脉痉挛的程度及痉挛后心肌的损伤。 3、通心络超微粉剂的应用能够抑制冠状动脉血管中NF-kB和iNOS的表达,减少血管组织中NF-kB的活化。 4、通心络超微粉剂可能通过降低血管组织中NF-kB和iNOS的表达从而达到改善血管内皮功能,缓解冠状动脉痉挛,减轻心肌损伤的作用,实现益气活血,通络止痛之功效。
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