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PRS基因cDNA克隆及葡萄RS基因转化胡萝卜的研究
中文名称: PRS基因cDNA克隆及葡萄RS基因转化胡萝卜的研究
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论文编号: 3522089收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning of Resveratrol Synthase cDNAs from Arachis Hypogaea L.and Transformation of Resveratrol Synthase Gene into Daucus Carota L.
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 白藜芦醇 花生cDNA文库 胡萝卜 遗传转化 基因转化 克隆 葡萄
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:白藜芦醇是具有抗病及多种保健功能的芪类次生代谢物,胡萝卜则是富含β胡萝卜素等多种营养成分的重要蔬菜,本研究着眼于创建具有白藜芦醇保健功能的胡萝卜新种质资源,在构建花生cDNA文库的基础上,筛选RS基因;构建适于胡萝卜遗传转化的RS基因表达载体,应用农杆菌介导的遗传转化方法,开展葡萄RS基因的胡萝卜遗传转化,获得转基因植株,从而为筛选具有较高保健功能的胡萝卜新种质资源以及相关代谢途径的分子生物学、分子生态学研究奠定基础。主要研究结果如下:1)从富含白藜芦醇的花生“金花1012”幼果中提取总RNA,所获得RNA的A260/A280比值为1.89,A260/A230比值为2.03,达到了用以构建cDNA文库的质量要求;采用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒,构建了花生幼果cDNA文库,其滴度达到了1×106pfu/ml,重组率达到99%以上。   2)采用基于PCR技术的96孔板cDNA文库筛选法,利用RS基因高度保守序列设计的引物,筛选cDNA文库获得了2个RS基因的阳性cDNA克隆。同源分析结果表明,该两个cDNA相互间的碱基序列有94%的同源性,与已经报道的花生RS基因cDNA有90%以上的同源性。推测上述两个阳性克隆是花生RS多基因家族不同成员的cDNA。   3)利用功能已经鉴定的葡萄RS基因cDNA和表达载体pCB,构建了适用于胡萝卜等双子叶植物遗传转化的表达载体。   4)建立了高效的胡萝卜农杆菌介导的遗传转化与再生体系,利用该体系开展了胡萝卜的遗传转化,获得了200个以上的转基因植株和可望进一步获得100个以上转基因植株的抗性胡萝卜愈伤组织。
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