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反义磷脂酶D_γ基因转化白三叶草的研究
中文名称: 反义磷脂酶D_γ基因转化白三叶草的研究
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论文编号: 3521998收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Studies on Transforming Antisense Phospholipase D_γ (PLD_γ) Gene into White Clover
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 白三叶草 根癌农杆菌 反义磷脂酶基因 遗传转化 转基因植株 耐盐 耐旱
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论文摘要: 白三叶草(Trifolium repens)是重要的(略).它既是重要的饲料作物,又在土壤改良、水土保持、以及生态环境保护方面发挥着积极作用. 本研究课题以白三叶草为实验材料,以它的芽为外植体进行再生培养,系统地研究了激素浓度、光照条件、外植体密度、培养容器等诸多因素对芽再生芽的影响,建立了(略)高频再生体系.在此基础上,用携带反义磷脂酶Dγ基因(PLDγ)的根癌农杆菌介导转化白三叶草芽外植体,通过对转化方法和条件的探索,建立了白三叶草的遗传转化体系.白三叶草遗传转化体系的建立(略)工程对白三叶草进行品种改良起着重要的作用. 研究结果表明,不同的激素浓度配比对白三叶草的生(略)生根等方面有重要影响.通过不同激素浓度配比的实验,确定了最佳壮苗培养基(MS + 0.15mg/L 6-BA + 0.1mg/L NAA + 0.1mg/L KT + 20mg/L Ad)叶片再生培养基(MS + 0.5mg/L 6-BA + 0.1mg/L NAA)、和生根培养基(1/2 MS + 0.1mg/L (略)H 值、琼脂浓度、温度、湿度等其他物理因素也对白三叶草的生长、分化、生根等有不...
White clover (Trifo(omitted)s) is one of the most important legume forage plants. As a forge crop, it plays an important role in improving natural environment and conserving(omitted) soil. The young shoots of White clovers were used as explants of transformation and several fa(omitted) as hormone concentration, explant sort(omitted)mination intensity were investigated to optimize the regeneration system in vitro. The antisense of phospholipase Dγ(anti-PLDγ) gene was intr(omitted)o the shoots of Whit...
目录:
中文摘要第8-10页
Abstract第10页
1 引言第12-26页
  ·植物耐盐碱、抗干旱基因工程研究进展第13-21页
    ·耐盐、抗旱调渗物质合成基因的克隆及作用机理第14-19页
      ·Imtl 基因第14页
      ·mtl D 基因和gut D 基因第14-15页
      ·ots 基因和TPS 基因第15-16页
      ·P5cs 基因第16页
      ·bets 基因和BADH 基因第16-19页
    ·植物抗盐和耐旱信号传导和表达调控的研究进展第19-21页
      ·信号传递和调控基因表达的转录因子第19-20页
      ·感应和传导胁迫信号的蛋白激酶第20-21页
  ·磷脂酶D(PLD)基因的作用及研究进展第21-23页
    ·磷脂酶D 的发现和PLD 基因家族第21-22页
    ·PLD 的生理作用第22-23页
  ·基因工程在白三叶草育种中的应用第23-24页
  ·选题依据第24-26页
    ·PLD 基因在植物育种上的应用潜力第24-25页
    ·白三叶草耐盐性研究的重要性第25-26页
2 材料与方法第26-39页
  ·实验材料第26-30页
    ·植物材料第26页
    ·菌株和质粒第26-27页
    ·细菌培养基第27页
    ·植物激素和植物培养基第27-28页
      ·植物激素第27页
      ·植物培养基第27-28页
    ·试剂第28-30页
      ·抗生素第28页
      ·植物基因组DNA 提取液第28-29页
      ·大肠杆菌质粒提取缓冲液第29页
      ·农杆菌双元载体质粒提取试剂第29页
      ·电泳缓冲液配制第29页
      ·Southern 杂交试剂第29-30页
      ·酶与生化试剂第30页
    ·PCR 引物第30页
    ·仪器第30页
  ·实验方法第30-39页
    ·白三叶草再生体系的建立第30-31页
      ·无菌苗的获得第30-31页
      ·壮苗培养第31页
      ·芽分化培养第31页
      ·根的诱导第31页
    ·白三叶草遗传转化体系的建立第31-33页
      ·选择培养基中选择压的确定第31-32页
      ·Cef 浓度对芽分化的影响第32页
      ·农杆菌介导转化第32-33页
      ·转化条件的优化第33页
    ·转化植株的分子检测第33-38页
      ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备第33-34页
      ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化第34页
      ·碱法少量提取质粒DNA第34-35页
      ·提取农杆菌双元载体质粒第35页
      ·植物基因组DNA 的提取第35-36页
      ·PCR 检测及电泳分析第36-37页
        ·PCR 反应体系第36-37页
        ·PCR 反应程序第37页
        ·电泳第37页
      ·PCR-Southern 检测第37-38页
    ·转化植株的耐盐性鉴定第38页
    ·转化植株的抗旱性鉴定第38-39页
3 结果与分析第39-58页
  ·白三叶草再生体系的建立第39-47页
    ·白三叶草无菌苗的获得第39-40页
    ·壮苗培养基的筛选第40-42页
      ·激素的影响第40页
      ·其他理化因素的影响第40-42页
    ·组培苗的芽再生第42-46页
      ·再生芽的获得第42-43页
      ·不同激素浓度对芽分化的影响第43-44页
      ·光照对芽分化的影响第44-45页
      ·琼脂浓度对芽分化的影响第45页
      ·培养容器对芽分化的影响第45-46页
      ·外植体密度对芽分化的影响第46页
    ·白三叶草根的诱导第46-47页
      ·生根培养基的筛选第46页
      ·琼脂浓度对生根的影响第46-47页
  ·白三叶草遗传转化体系的建立第47-53页
    ·选择压的确定第47-48页
    ·抑菌性抗生素的选择第48-49页
    ·预培养对转化的影响第49-50页
    ·农杆菌菌液浓度对转化的影响第50页
    ·侵染时间对转化的影响第50-51页
    ·共培养对转化的影响第51-52页
    ·恢复培养对转化的影响第52-53页
    ·转化植株的获得第53页
  ·转基因植株的生物学鉴定第53-58页
    ·PCR 扩增检测第53-54页
    ·PCR-Southern 杂交检测第54-55页
    ·转反义PLDγ基因植株的耐盐性测定与筛选第55-56页
    ·耐盐性植株的抗旱性测定第56-58页
4 讨论第58-61页
  ·白三叶草的遗传转化体系的建立第58-59页
  ·农杆菌介导转化方法的优化第59-60页
  ·生物基因表达的反义调控第60-61页
  ·预期结果的实现需要大田试验第61页
  ·下一步工作设想第61页
5 结论第61-62页
参考文献第62-75页
致谢第75-76页
攻读学位期间形成的学术论文第76页
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