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PVY~N HC-Pro及其突变体转化普通烟及本生烟的研究
中文名称: PVY~N HC-Pro及其突变体转化普通烟及本生烟的研究
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论文编号: 3521964收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Transformation of Nicotiana Tobacum and N.benthamiana with Potato Virus Y HC-Pro and Its Mutants
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 植物病理
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 蚜传 RNA沉默 马铃薯Y病毒 反向重复 HC-Pro 转基因
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 蚜虫传毒的辅助成分蛋白酶(helper component proteinase ,HC-Pro)是马铃薯Y病毒属病毒编码(略)白.在结构上,HC-Pro可以分为三个区域:对于蚜传功能极为重要的N端,具有蛋白酶活性的C端,负责其它功能的中间区域.蚜传功能与两个保守的基序有关:与蚜虫口针结合的KITC基序及与CP(略)G基序互作的PTK基序.本研究缺失HC-Pro的蚜传必需的区域,将其导入烟草中表达从而与野生型HC-Pro竞争以抑制蚜虫传毒的效率. RNA沉默是转录后的RNA在细胞质中发生了序列特异地降解.利(略)本身的基因或核苷酸序列转化植物能够获得抗病毒的工程植株.越来越多的研究表明,dsRNA(double-stranded RNA)是RNA沉默的起始因子.将H(略)因作为基因源,用其中间序列构建反向重复结构,为以后通过转基因获得高效的抗病品系打下基础.研究的结果及结论如下: ⒈ 通过PCR扩增PVYN HC-Pro 5′?端长542bp的短片段.将扩增出来的翻译 的片段插入到克隆载体pUC18的BamHI和KpnI之间得...
The helper component proteinase (HC-Pro) is a key protein encoded byplant viruses of the genus Po(omitted)C-Pro can be schem(omitted)ivided intothree regions: an N-terminal region essential for the transmissio(omitted) aC-terminal region harboring the proteinase activity, and a central regionimplicated in other functions. The transmission function involves twoconserved motifs(omitted)he N-terminal KITC motif that is involved inbinding to (omitted)vector’s stylets. The other is the C-terminal PTK motif,...
目录:
目录第4-8页
摘要第8-12页
第一部分 文献综述第12-34页
  第1章 马铃薯Y 病毒属病毒蚜传辅助蛋白(Helper Component Proteinase)研究进展第12-22页
    ·病毒的基因组结构及HC-Pro 的发现第12-14页
    ·HC-Pro 的功能及研究进展第14-22页
      ·HC-Pro 参与病毒复制及症状表达第14-15页
      ·HC-Pro 参与病毒移动第15-16页
      ·HC-Pro 参与病毒种传过程第16-17页
      ·蛋白酶活性第17页
      ·协生作用第17-18页
      ·蚜传因子活性第18-20页
      ·沉默抑制活性第20-22页
  第2章 RNA介导的病毒抗性第22-32页
    ·RNA 沉默及其介导的对病毒的抗病第22-29页
      ·RNA 沉默现象第22-23页
      ·RNA 沉默作用的机理第23页
      ·dsRNA 是RNA 沉默的诱导因子第23-25页
      ·RNA 沉默信号第25-26页
      ·RNA 沉默效应复合物的建立第26-28页
      ·RISC的功能第28页
      ·转基因植物中RNA介导的病毒抗性第28-29页
    ·RNA沉默的抑制第29-32页
      ·沉默抑制现象第29页
      ·沉默抑制蛋白第29-32页
  第3章 研究的目的与意义第32-34页
第二部分 实验研究第34-91页
  第1章 马铃薯Y 病毒HC-Pro 突变体构建及转基因研究第34-68页
    ·材料第34页
      ·病毒毒源第34页
      ·供试植物第34页
      ·菌种、质粒、主要试剂第34页
    ·方法第34-54页
      ·PVYNHC-Pro 短片段的获得第34-36页
      ·质粒pUCHC DNA 的提取第36-37页
      ·质粒DNA 的酶切、DNA 片段的酶切及酶切的质粒与DNA 片段的连接第37-38页
      ·感受态细胞的制备第38-39页
      ·重组质粒载体向大肠杆菌的转化第39页
      ·重组质粒载体的提取与鉴定第39-40页
      ·HC-Pro 基因N1短片段原核表达载体pETN1的构建及原核表达第40-43页
      ·HC-Pro 基因N1 短片段真核表达载体pROKN1 的构建第43-48页
      ·重组的质粒载体pROKN1 的真核表达第48-54页
    ·结果与分析第54-65页
      ·短片段N1 的PCR 扩增第54-55页
      ·N1 片断的克隆及重组子鉴定第55页
      ·基因序列的测定与分析第55-57页
      ·原核表达载体的构建第57页
      ·SDS-PAGE 分析第57-58页
      ·真核表达载体的构建第58-59页
      ·烟草转基因植株再生第59-62页
      ·转基因烟草的抗病性分析及ELISA 检测第62-65页
      ·蚜虫传毒实验第65页
    ·结论与讨论第65-68页
      ·小结第65-66页
      ·讨论第66-68页
  第2章 本生烟叶组织培养及遗传转化体系的建立第68-80页
    ·前言第68页
    ·材料与方法第68-70页
      ·材料第68页
        ·烟草第68页
        ·培养基第68页
      ·方法第68-70页
        ·本生烟组培体系的建立第68-69页
        ·N1、HC、C2 转化本生烟第69页
        ·实时荧光PCR 检测355 启动子及NOS 终止子第69-70页
        ·转基因植株的抗病性及ELISA 检测第70页
    ·结果与分析第70-78页
      ·芽分化第70-71页
      ·生根第71页
      ·移栽第71-72页
      ·利用355 启动子基因和NOS 终止子基因实时荧光PCR 检测转基因第72-76页
      ·转基因烟草的抗病性分析及ELISA 检测第76-78页
    ·结论与讨论第78-80页
  第3章 来源于HC-Pro 基因中间区域的单链RNA 及双链RNA 的真核表达载体的构建第80-91页
    ·材料与方法第80-85页
      ·材料第80页
      ·方法第80-85页
        ·PVYNHC-Pro 中间区域短片段DSM 的克隆第80-82页
        ·正向单链片段植物表达载体pFGC1008/DSM 的构建第82-83页
        ·基于正向单片断植物表达载体pFGC1008/DSM的双链RNA表达载体pFGC1008/dsDSM的构建第83-85页
        ·鉴定的 pFGC1008、pFGC1008/dsDSM、pFGC1008/DSM 转化农杆菌 LBA4404第85页
    ·结果与分析第85-89页
      ·短片段DSM 的PCR 扩增第85页
      ·DSM 片断的克隆及重组子鉴定第85-86页
      ·基因序列的测定与分析第86-87页
      ·正向单片段植物表达载体pFGC1008/DSM 的构建第87-88页
      ·基于正向单片断植物表达载体pFGC1008/DSM 的 双 链 RNA 表 达 载pFGC1008/dsDSM的构建第88页
      ·pFGC1008、pFGC1008/DSM、pFGC1008/dsDSM 转化农杆菌LBA4404第88-89页
    ·结论与讨论第89-91页
      ·小结第89页
      ·讨论第89-91页
结论第91-92页
参考文献第92-102页
致谢第102页
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