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禽流感病毒(H5N1)NA基因的克隆与序列分析
中文名称: 禽流感病毒(H5N1)NA基因的克隆与序列分析
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论文编号: 3521798收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Molecular Cloning and Sequencing of NA Gene of Avian Influenza Virus
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 基础兽医学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 禽流感病毒 NA基因 克隆 序列分析
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论文摘要: 神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒的两种表面糖蛋白之一,主要功能是在感染到靶细胞之前,为要出芽的病毒粒子从宿主细胞表面释放出来清理通道.本研究的目的是克隆三株(北京株、澳门株和珠海株)禽流感病毒((略)1基因,为以后的分子生物学研究和诊断基因芯片的开发做准备.收获接毒的SPF鸡胚的尿囊液,超速离心来沉淀病毒,用血液凝集反应测定效价.采用异硫氰酸胍法提取禽流感病毒分离株的SPF鸡胚(略),以(略)对特异引物,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出三株禽流感病毒神经氨酸酶(H5N1)N1的cDNA.用自制的试剂纯化目的片段,通过T-A连接将已加A尾的PCR产物连接到克隆载体PMD 18-T Vector上,转化JM109感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB平板(或麦康凯琼脂平板)上筛选阳性克隆,经PCR扩增,进一步(略)段,并对目的片段进行测序.结果获得NA基因全长序列,其中北京毒株1218个碱基,编码373个氨基酸;澳门毒株1236个碱基,编码418个氨基酸;珠海毒株1204个碱基,编码380个氨基酸,均含有完整的开放阅读框架.并(略)同源性比较,同源性高达99%.与...
Avian influenza A (omitted)e widespread among domestic poultry and are recently isolated from humanswith respiratory illness in Ch(omitted)gh this avian is not highly pathogenic for avian species,these viruses have recently been transmitted to mannalian species,including humans.Ne(omitted)en is one of two kinds of surface glycoprotein.The purpose of this research is to amplif(omitted)ene.It will provide t(omitted)ion for the study of molecular and gene chip of AlV.We obtained allantoic fluid from SPF c...
目录:
摘要第4-5页
前言第5-12页
  ·禽流感病毒的分子生物学进展第5-7页
  ·禽流感诊断技术的研究现状及进展第7-9页
  ·NA基因概述第9-11页
  ·本实验的主要目的第11-12页
材料及试剂的配制第12-15页
  ·毒株和鸡胚第12页
  ·试剂和培养基第12-13页
  ·引物第13页
  ·主要仪器设备第13-15页
方法第15-20页
  ·病毒的增殖第15页
  ·测血凝效价第15页
  ·病毒RNA的提取第15页
  ·RT-PCR第15-16页
  ·PCR产物的纯化第16-17页
  ·PCR产物克隆第17-19页
  ·序列测定第19页
  ·三株病毒的核苷酸序列比对分析(图4)第19-20页
结果第20-33页
  ·病毒血凝效价测定结果第20页
  ·RT-PCR电泳结果第20页
  ·RT-PCR扩增产物的克隆与鉴定结果第20-21页
  ·NA基因片段的核苷酸序列第21-25页
  ·序列比较分析第25-33页
讨论第33-36页
  ·序列分析第33页
  ·遗传进化分析第33-34页
  ·同源性比较第34-35页
  ·实验方法改进第35-36页
结论第36-37页
参考文献第37-41页
英文摘要第41页
附录第42-43页
致谢第43页
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