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HMW-Glu(1Dx5、1Dy10)亚基基因在大肠杆菌中的融合表达
中文名称: HMW-Glu(1Dx5、1Dy10)亚基基因在大肠杆菌中的融合表达
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论文编号: 3521667收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on HMW-Gs(1Dx5、1Dy10) Fusion Expression in E.Coli
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 作物遗传育种
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 高分子量麦谷蛋白 大肠杆菌 基因表达 包涵体 表达载体pRSETA
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 研究表明:高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)1Dx5+1Dy10是由染色体(略)密连锁的基因所控制,它们与面包烘烤品质有很大的关系.而利用转基因技术将HMW-GS1Dx5+1Dy10转入小麦栽培品种中以改良小麦加工品质是近年来的研究热点之一.但是,由于小麦基因表达的复杂性及人们对高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)1Dx5、1Dy10在面包加工过程中确切作用还了解不深,(略)能得到令人满意的结果.鉴于此,为了进一步了解sub5和sub10的结构及其在面包烘烤中的作用,本文对1Dx5、1Dy10基因分别在原核细胞中表(略).主要内容如下: 将麦谷蛋白亚基1Dx5和1Dy10分(略)载体pRSETA中,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌株中.在T_7启动子控制下表达出融合蛋白,而其N端带有6xHis Tag标签有利于表达产物的分离纯化.IPTG诱导5小时后收获菌体,破碎、提取表达蛋白,并进行SDS-PAGE检测.为了提高目标蛋白的表达水平,进行了条件优化,诸如培养基、诱导时间和诱导剂量.麦谷蛋白亚基1Dx5和1Dy1(略)别是:在2YT培养基上...
Studies show that high molecular weight glutenin subunits 1Dx5+1Dy10 (or sub(omitted)ontrolled b(omitted)tly linked genes on 1D chromosome may play an essential role in bread baking quality. Nowadays, It is one of i(omitted)esearch fields to improve wheat flour processing quality by transformation of HMW-GS 1Dx5+1Dy10 genes with wheat cultivars. However no satisfying results hav(omitted)ained up to now because of the complexities of wheat gene expression and the knowledge sho(omitted)oles of sub5 and s...
目录:
摘要第7-8页
1.文献综述第8-15页
  ·小麦高分子量谷蛋白亚基研究进展第8-10页
    ·小麦高分子量谷蛋白亚基概述第8页
    ·小麦高分子量谷蛋白亚基的遗传第8-9页
    ·小麦高分子量谷蛋白亚基与烘烤品质的关系第9-10页
  ·HMW—GS(1DX5+1DY10)亚基基因转化小麦的研究进展第10页
  ·载体简介及调控机制第10-11页
    ·pRSET-A载体第10-11页
    ·调控机制第11页
  ·外源基因在大肠杆菌中的表达第11-14页
    ·启动子(promoter)的选择第11-12页
    ·分子伴侣的作用第12-13页
    ·二硫键的形成第13页
    ·提高活性蛋白表达策略第13-14页
  ·包涵体的产生及复性研究第14-15页
2.引言第15-16页
3.实验材料与方法第16-24页
  ·菌株与质粒第16页
  ·酶和化学试剂第16页
  ·基因第16页
  ·实验方法第16-24页
    ·基因的亚克隆技术第16-19页
    ·培养基配制第19页
    ·质粒的提取及纯化第19-20页
    ·琼脂糖凝胶电泳第20页
    ·菌体的培养第20-21页
    ·蛋白质提取及煮样第21页
    ·表达组分分析第21页
    ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第21-23页
    ·发酵条件的优化第23-24页
4.结果与分析第24-38页
  ·亚克隆质粒pET-17B载体+SUB5、SUB10目的基因的构建第24-25页
  ·表达载体的构建第25-32页
  ·麦谷蛋白SUB5,SUB10基因在大肠杆菌中的克隆及融合表达第32页
  ·发酵条件的优化第32-38页
5.结论与讨论第38-40页
  ·结论第38页
  ·讨论第38-40页
    ·培养条件对外源基因表达的影响第38-39页
    ·目的蛋白可溶组分的纯化和包涵体的纯化第39-40页
参考文献第40-44页
英文摘要第44页
附录第45-46页
  测序结果:SUB10第45-46页
  测序结果:SUB5第46页
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