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体外定向诱导干细胞分化为胰岛样细胞
中文名称: 体外定向诱导干细胞分化为胰岛样细胞
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论文编号: 3521371收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Differentiation of Stem Cells into Islet-Like Clusters in Vitro
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床检验诊断学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 胎儿 骨髓间充质干细胞 胰腺干细胞 体细胞核移植 人胚胎干细胞 诱导分化 糖尿病 胰岛细胞移植 胰岛素 胰高糖素
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:  目的:为糖尿病细胞替代治疗提供理想的种子细胞,分别行胎儿骨髓间充质干细胞(MSCs)、胎儿胰腺源性干细胞(PSCs)以及构建人自体基因的胚胎干细胞(SCNT-hES)向胰岛样细胞的定向诱导分化,动态观察诱导分化细胞形态的时空变化及阶段特异性抗原表达,对终末分化细胞进行定性鉴定及功能检测。   方法:⒈取自然流产胎儿的股骨、胫骨等长骨骨髓,采用全骨髓培养法,按1x106/ml的密度接种至含10﹪胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中,5﹪CO2箱中孵育48h后换液,每3d换液1次,细胞贴壁生长呈成纤维样,1:3传代继续扩增培养,取3-8代MSCs予以2-巯基乙醇、EGF、bFGF、B27及尼克酰胺分三阶段定向诱导分化为胰岛样细胞。⒉同时取胎儿胰腺体组织,机械破碎,胶原酶及胰酶消化,离心后将单细胞悬液种植于含10﹪FBS及1XB27的高糖DMEM培养基中,48h后培养液改换为含2﹪FBS及1XB27的DMEM-F12培养液,1:2消化传代。观察加ITS-A及EGF后细胞自发分化为神经元及胰岛样结构,同时予以EGF、bFGF、B27及尼克酰胺分两阶段定向诱导分化。⒊取山东省干细胞工程技术研究中心自行建立的体细胞核移植胚胎干细胞系(SCNT-hES),采用六阶段诱导分化。对三种不同来源的各期细胞分别进行形态学观察、双硫腙染色、免疫细胞组织化学及共聚焦显微镜免疫荧光鉴定nestin、PDX-1、insulin及glucagon的表达,并用电化学发光法定量测定胰岛素分泌量。 结论:骨髓源性干细胞、胰腺源性干细胞及体细胞核移植人胚胎干细胞均可以在体外定向诱导分化为胰岛样细胞,骨髓间充质细胞来源广泛且细胞增殖速度快;胰腺源性干细胞增殖较慢但其胰岛素分泌量明显优于骨髓细胞,接近原生细胞;而体细胞核移植胚胎干细胞因含有自体基因而拥有的免疫相容性则代表了未来糖尿病细胞治疗的发展发向。
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