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CD59基因突变与糖尿病血管病变的相关性研究
中文名称: CD59基因突变与糖尿病血管病变的相关性研究
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论文编号: 3521283收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Study on the Relationship between Mutant CD59 and Vescular Proliferation of Diabetes
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 病原生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: CD59突变 真核表达 细胞转染 CHO细胞 抗补体活性 基因突变 糖尿病血管病变
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:  目的:分别构建两种突变人CD59的重组质粒,获得高效表达的CHO细胞真核表达系统,探讨突变CD59基因表达蛋白糖基化前后抗补体活性的变化,为在基因水平阐明糖尿病血管增殖症的发病机理奠定基础。   方法:将两种含不同突变基因的人CD59全长cDNA序列(HM7、HM8)的重组pALTER质粒转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选阳性克隆并扩增。重组质粒与pcDNA3质粒,按3:1比例,运用阳离子脂质体导入法共转染CHO细胞,用含有400μg/ml新霉素类似物(G418)的F12培养基培养13天筛选出阳性表达克隆,应用荧光免疫组化(FIH)、酶免疫组化(EIH)及流式细胞术(FACS)检测CD59在CHO细胞表面的表达。经染料释放试验检测突变CD59糖基化前后抗补体活性。   结论:建立了两个高效表达突变CD59的真核表达系统,获得阳性克隆细胞株。初步研究证实突变CD59具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低。本阶段研究为单克隆抗体的制备准备了条件,为在基因水平探讨糖尿病血管增殖症的发病机理奠定了基础。
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