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T细胞非霍奇金淋巴瘤6号染色体长臂杂合性缺失的研究
中文名称: T细胞非霍奇金淋巴瘤6号染色体长臂杂合性缺失的研究
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论文编号: 3444284收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Loss of Heterozygosity on the Long Arm of Chromosome 6 in Peripheral T Cell Non-Hodgkin s Lymphoma
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 病理与病理生理学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 肿瘤抑制基因 T细胞非霍奇金淋巴瘤 杂合性缺失 6号染色体长臂 细胞信号转导 免疫组织化学 非霍奇金淋巴瘤
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论文简介:T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)是一种相对少见的淋巴瘤,在欧美人群的发生率约占10%-15%,在亚洲人群中发生率稍高,达到30%。T-NHL是一种异质性的恶性淋巴肿瘤,目前国内外对T-NHL的病理形态学、免疫学或细胞分子遗传学特征的研究,以及临床治疗研究都十分有限。 人类肿瘤的发病是一个多步骤多基因异常积累的过程,包括原癌基因的激活、抑癌基因的失活。目前已知人类肿瘤基因或基因组的不稳定性有多种形式,其中有二种类型研究较多:微卫星不稳定性(MSI),主要以DNA错配修复基因缺陷为主;另一种为杂合性缺失(LOH),主要以肿瘤抑制基因(TSGs)失活为主。LOH是指细胞有丝分裂异常导致一个与突变基因相对应的正常等位基因丢失。表现为一个位点两条等位基因中任一条的丢失。现代研究表明LOH是人类肿瘤发生过程中导致抑癌基因失活的主要机制之一,LOH分析常用于在染色体基因排列的遗传图谱中标识出假定的或已知的TSGs。 6号染色体长臂(6q)LOH在许多实体肿瘤中已有报道,如卵巢癌、胸腺癌、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、小细胞肺癌、前列腺癌和甲状旁腺腺瘤等肿瘤中均有6q的缺失,而在T-NHL中的报道相对较少。为此,我们检测48例T-NHL6q14-26上12个高度多态性微卫星标记物的LOH情况,并分析其与临床病理特征的关系,确定与T-NHL相关的6q上的最小缺失区(RMDs),为进一步寻找与T-NHL发病相关的抑癌基因提供有意义的信息,以求进一步阐明T-NHL发病的分子学机制。 本研究获浙江省科技厅科学研究基金和卫生厅科学研究基金资助肿瘤的发展是多步骤多基因异常积累的过程,T-NHL的发生发展同样也需要多种机制的参与,这些机制可以相互相关,也可相互独立存在。P53和Ki67是传统认为与T-NHL发生发展有关的两种蛋白,ZAP-70是参与T细胞信号转导途径的非常重要的酪氨酸蛋白激酶(PTK)家族成员之一,目前研究发现其在不成熟的正常B细胞和部分B细胞淋巴瘤中也有表达,不同淋巴细胞中此种蛋白表达的差异成为研究的一个热点,ZAP-70蛋白在T-NHL中是否完全表达还需进一步探索,故本研究运用免疫组织化学(IHC)方法检测48例T-NHL中ZAP-70、P53以及Ki67蛋白表达水平变化,并分析与T-NHL发生发展可能有关的这些蛋白的异常表达及6qLOH之间是否存在一定的相关性,以求更深入地探索T-NHL发病的多个复杂机制及这些机制的相关性。 材料与方法: 1.材料收集 1997-2005年间该医学院附属医院及省内其他医院病理科初步诊断为T细胞淋巴瘤的48例病例以及相对应的正常对照组织48例;其中男35例,女13例,平均年龄50岁。全部标本经中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,常规HE染色,免疫组织化学标记确定肿瘤的免疫表型,根据2001年WHO诊断标准,对所有T细胞淋巴瘤进行分类,同时参照1992年Keil标准进行组织学分类,低度恶性组15例,高度恶性组33例。 2.方法 ⒈免疫组织化学方法检测T细胞淋巴瘤中CD3,CD4,CD8,Bcl-2,CD20,CD45RO,LMP-1,CD30的表达,确定肿瘤的免疫表型。 ⒉常规蛋白酶K-酚氯仿法提取肿瘤组织和正常对照组织DNA。 ⒊选取6q14-26区段上的12个多态性微卫星标记,行聚合酶链式反应—单链长度多态性(PCR-SSLP)分析,选取信息性样本比较肿瘤组织和正常对照组织等位基因条带的光密度值变化,以检测LOH的发生,确定发生缺失的最小重叠区段,同时分析6qLOH与肿瘤样本临床病理特征的关系。 ⒋选择2个可能与T细胞淋巴瘤发病相关的基因(ZAP-70,P53)以及一个能反映细胞增5殖活性的标记物Ki67,运用免疫组织化学方法检测这3种蛋白在T细胞淋巴瘤中的表达水平变化,并分析3种蛋白之间以及各蛋白与6qLOH的相关性。 ⒌统计学处理:实验结果均使用SPSS12.0软件进行统计学分析,行x2检验和(或)Fisher's精确概率法检验,t检验以及Spearman's相关性分析。 结论: 1.6qLOH与T-NHL的恶性程度及EBV感染情况在统计学上有一定的相关性。 2.6q21-22和6q25区段可能存在一个或者多个候选肿瘤抑制基因,这些抑癌基因的失活可能在T-NHL的发病机制中发挥重要作用。 3.ZAP-70蛋白表达的缺失作为一种异常的T细胞免疫受体表型对于恶性T细胞淋巴瘤的诊断具有一定的辅助作用。 4.P53、Ki67与T-NHL的恶性进展呈正相关,且两个指标之间存在相关性。 5.P53与6qLOH之间存在一定的正相关性,可能在T-NHL的发病过程中相互协调共同促进肿瘤的形成。
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