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小鼠和兔种间体细胞核移植研究
中文名称: 小鼠和兔种间体细胞核移植研究
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论文编号: 3218671收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on the Interspecies Somatic Nuclear Transfer between Mouse and Rabbit
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 细胞生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 胎儿成纤维细胞 种间体细胞核移植 小鼠 卵母细胞 胚胎发育 小鼠卵母细胞 种间核移植
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:本研究在建立了小鼠(兔)卵母细胞去核、激活及电融合法构建小鼠-兔(兔小鼠)种间体细胞核移植胚胎等方法的基础上,以供体细胞的培养和处理以及重组胚的激活为重点研究了小鼠-兔以及兔-小鼠种间体细胞核移植胚的早期发育。 实验研究一:本实验以兔胎儿成纤维细胞为供体,去核小鼠卵母细胞为受体进行兔-小鼠种间核移植研究,结果如下: 1.比较了几种不同化学激活方法对小鼠卵母细胞激活的影响,结果表明,在10mM Sr<'2+>内培养4h能有效地激活小鼠卵母细胞;HCG注射后20h为小鼠卵母细胞进行SrCl<,2>孤雌激活的最适卵龄;激活液中CCB的存在对小鼠孤雌胚胎的发育有利。 2.为了提高供体细胞中处于G<,0>/G<,1>期细胞的比例,本研究将传代培养4—6代的兔胎儿成纤维细胞分别进行下面不同处理:⑴20mM Roscovitine培养24h;⑵2μg/ml Aphidicolin培养24h;⑶完全汇合;⑷血清饥饿3天;⑸血清饥饿7天;⑹对照组。结果表明,完全汇合是供体细胞同步于G<,0>/G<,1>期较好的方法。 3.本实验用几种不同的融合条件融合兔-小鼠种间核移植重组胚,结果表明电场强度为180V/mm、脉冲时间为10μs、脉冲次数为2次是构建兔一小鼠种间核移植重组胚的最佳电融合条件。 4.分别以处于完全汇合状态、70﹪~80﹪汇合的兔胎儿成纤维细胞为供体细胞,以小鼠卵母细胞为受体细胞进行核移植,构建的重组胚在体外培养,结果表明,完全汇合与处于70﹪~80﹪汇合的兔胎儿成纤维细胞作供体所构建的种间核移植胚胎,尽管卵裂率与囊胚发育率在统计上无显著差异(P>0.05),但完全汇合组的卵裂率与囊胚发育率都略高于对照组。 5.以兔胎儿成纤维细胞为供体细胞,以小鼠卵母细胞为受体细胞构建的重组胚在体外可发育到囊胚期,说明小鼠卵胞质能够使兔体细胞发生发育程序重编,完成早期胚胎的发育。 实验研究二:以小鼠胎儿成纤维细胞为供体,兔去核卵母细胞为受体进行小鼠-兔种间核移植研究,结果如下: 1.为了寻找体外培养兔胚胎的最佳培养条件,本实验将孤雌激活的兔胚胎分别放入Ham,s F<,12>+BSA、1640+BSA、M199+BSA、RD培养液(1640: DMEM=1:1)+BSA、RD+FBS五种培养液进行体外培养,研究发现 RD+FBS内孤雌激活兔胚的囊胚发育率明显高于其他各组,表明RD +FBS为兔胚胎的最佳培养液。 2.本实验用几种不同的融合条件融合小鼠一兔种间核移植重组胚,结果表明电场强度为240V/mm,脉冲时间为20μs,脉冲次数为2次为构建小鼠一兔种间核移植胚胎的最佳电融合条件。 3.以小鼠胎儿成纤维细胞为供体细胞,以兔卵母细胞为受体细胞构建的重组胚在体外可发育到囊胚期,说明兔卵胞质可使小鼠体细胞核发生发育程序重编,并完成其早期胚胎发育。
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