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PRGL基因的原核表达及抗体制备
中文名称: PRGL基因的原核表达及抗体制备
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论文编号: 3218657收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Prokaryotic Expression of PRGL and Preparation of Its Antibody
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 细胞生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: PRGL基因 PRP片段 原核表达 多克隆抗体 基因 原核表达载体 融合蛋白表达
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:PRGL(Proline-Rich GASA-like)是本实验室从非洲菊花瓣克隆的新基因。该基因既具有GASA的同源部分,也有与PRP基因结构相似的区域,初步认为该基因可能与GA诱导有关,并可能定位于细胞壁。为了研究PRGL的功能,本研究将编码PRGL全长的基因以及编码PRP区域的序列分别进行原核表达并制备多克隆抗体,为进一步研究奠定基础。主要研究结果如下: 本实验用pET32a构建pET32a-PRGI,原核表达载体,经DNA测序正确后,在菌液起始浓度OD<,600>为0.6,IPTG浓度为0.6 mM,28℃诱导时间为6h条件下,诱导表达出34.76kD的PRGL目的蛋白。用pET30c构建pET30c-PRP原核表达载体,经DNA测序正确后,在菌液起始浓度OD<,600>为0.6,IPTG浓度为1.0mM,28℃诱导时间为6h条件下,获得13.64kD的含有PRP区域的目的蛋白。随后利用融合蛋白中自带的His标签,证明了融合蛋白表达的正确性。 通过对诱导表达后的蛋白进行定量,注射新西兰兔进行免疫。在对家兔进行免疫之前,先耳缘静脉取血,获得血清,-80℃冻存以作空白对照。经三次加强免疫后,用Elisa检测免疫后抗体的产生,发现以上两种抗体在稀释600倍时仍然具有免疫活性。 用诱导表达后的大肠杆菌总蛋白为抗原,免疫前及免疫后的血清为一抗,HRP为二抗,进行Western Blot检测免疫后抗体的有效性,证实PRGL蛋白以及PRP蛋白的多克隆抗体己制备成功。 采用PRGL蛋白抗体,以Western Blot初步检测了非洲菊P2和P6花瓣的蛋白表达,发现P2花瓣有一特异条带,对此条带的出现进行了讨论。
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