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Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
中文名称: Aspergillus tamarii FS132脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
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论文编号: 3218407收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Cloning of Aspergillus Tamarii FS132 Lipase Gene and Its Expression in Pichia Pastoris
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: Aspergillus tamarii 脂肪酶 18S rRNA基因 基因克隆 基因表达 18S rRNA基因
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:本研究从新疆火焰山土样中分离到一株脂肪酶产生菌FS132,对其进行18SrRNA分子标记鉴定,进一步克隆了该菌脂肪酶基因(ATL),并实现了该脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达,为深入研究Aspergillus tamarii脂肪酶合成的分子机理奠定了基础,也为改造现有脂肪酶提供新的脂肪酶基因资源。主要研究内容及成果如下: ⒈从新疆火焰山口土样中分离的一株脂肪酶产生菌FSl32,菌落形态表明为霉菌。克隆测定了该菌18S rRNA基因序列,并将该序列进行比对和聚类分析,构建系统进化树。结果表明该菌与报道的 Aspergillus tamarii具有最紧密亲缘关系。 ⒉ ATL 基因及其cDNA的克隆和序列分析:分别提取Aspergillus tamarii FS132基因组DNA和总RNA,根据资料,利用Aspergillus tamarii亲源关系较近的脂肪酶基因序列设计引物,采用PCR、RT-PCR等技术扩增了FS132脂肪酶基因(ATL)和全长cDNA序列。ATL-cDNA全长由921个碱基组成;PCR扩增获得的ATL-DNA由1742个碱基组成,包括ATL编码区,3'非翻译区和5'非翻译区基因的序列,其中ATL编码区有1024个碱基,含有2个内含子,大小分别为51 bp、52 bp。 ⒊ 为了验证所克隆到的ATL-cDNA序列的功能,构建重组表达载体,以毕赤酵母GS115为宿主进行功能表达分析。表达菌株经0.5%甲醇诱导培养,实现了Aspergillus tamarii FS132脂肪酶蛋白的分泌表达。经SDS-PAGE分析结果表明,重组酵母分泌36.7 kD左右的重组蛋白;三丁酸甘油酯检验板中出现水解圈;NaOH滴定法测定表明发酵液脂肪酶活力为20U/mL。 ⒋ 初步优化了 Aspergillus tamarii FS132发酵产酶条件,产酶最适培养时间为45 h,培养基最适初始pH 7.0,最适培养温度36℃,最适摇瓶空气量25 mL/250 mL锥形瓶。
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