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L-天冬氨酸α-脱羧酶生产β-丙氨酸的研究
中文名称: L-天冬氨酸α-脱羧酶生产β-丙氨酸的研究
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论文编号: 3218084收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on Production of β-Alanine by L-Aspartate-α-Decarboxylase
学位类型: 硕士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 微生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: L-天冬氨酸α-脱羧酶 β-丙氨酸 HPLC 基因工程 发酵 转化
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:本论文建立了2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法直接检测β-丙氨酸与L-天(门)冬氨酸的新方法。该方法色谱条件为:色谱柱为Zorbax SB C18柱(5μm,4.6*250mm);流动相A为0.02mol/LNaAc-HAc缓冲液,pH6.2,流动相B为乙腈,采用线性梯度洗脱:时间(min)0→20,流动相B(体积百分含量,%)5→33;流速为1.0mL/min:柱温为30℃;检测器为紫外可见光检测器,检测波长为360nm,参比波长为600nm;进样量为20μL。 采用基因工程的手段,用PCR技术扩增了E.coli DH5α中编码L-天冬氨酸α-脱羧酶的panD基因,将panD基因连接入表达载体pET28b(+)中形成重组质粒pET28b(+)-panD,再转化表达宿主菌E.coliBL21(DE3),经卡那霉素抗性筛选获得了高表达L-天冬氨酸α-脱羧酶的工程菌株E.coli BL21(DE3)/pET28b(+)-panD。对工程菌和对照菌株E.coli DH5α、E.coli BL21(DE3)、E.coli BL21(DE3)/pET28b(+)进行产酶比较,发现工程菌的产酶能力有极大提高,经0.4mmol/L的IPTG和8g/L乳糖诱导后酶活分别为98.00U和150.91U,摩尔产物得率分别为14.11%和21.73%,而对照菌株用相同方法检测不到β-丙氨酸。 对工程菌E. coli BL21(DE3)/pET28b(+)-panD的发酵工艺条件进行优化,优化后的发酵条件为:以1%接种量将种子液接入装液量为50mL/250mL的发酵培养基中,37℃、200r/min培养2h后,添加乳糖至终浓度为10g/L,30℃、150r/min诱导24h。以优化后的工艺条件进行发酵产酶,酶活达到224.96U,比优化前提高了448.01%。对工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28b(+)-panD的转化工艺条件进行优化,优化后工艺条件:底物为0.02mol/L、pH4.49的L-天冬氨酸钠盐;转化温度为30℃;转化时间为48h。以优化后的条件进行转化实验,β-丙氨酸产量是优化前的110%倍,增加了10%。
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