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人肝脏凋亡相关蛋白相互作用蛋白质的规模化发掘
中文名称: 人肝脏凋亡相关蛋白相互作用蛋白质的规模化发掘
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论文编号: 3122222收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Digging the Proteins Interacted with Apoptosis Associated Proteins in Liver by Large Scale
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床检验诊断学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 凋亡蛋白 酵母双杂交 肝脏疾病 蛋白质组学 凋亡相关蛋白 相互作用蛋白质 细胞凋亡
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论文简介:凋亡是一个被高度调控的细胞死亡过程,它对保持成熟器官的组织动态平衡具有基础性作用。近年来的大量研究表明,凋亡在大多数细胞中是一个生理上的程序,能被许多外部和内部的信号所触发。许多人类的疾病都直接或者间接的归咎于凋亡的紊乱,凋亡紊乱具体表现为细胞的正常死亡受阻引起的细胞积聚,或者凋亡过度引起的细胞丢失。细胞凋亡的途径主要有两条,一条是通过胞外信号激活细胞内的凋亡酶caspase、一条是通过线粒体释放凋亡酶激活因子激活caspase。这些活化的caspase可将细胞内的重要蛋白降解,引起细胞凋亡。肝脏是人体重要的器官。近年来的研究表明,凋亡在肝脏疾病的发生发展中具有重要的作用。在肝硬变病例的肝细胞、胆管细胞、单核细胞中普遍存在凋亡现象。肝细胞癌形成过程中,不仅癌细胞异常增生,而且突变的细胞凋亡减少,肝癌细胞对凋亡诱导反应明显缺陷。因此凋亡对肝脏正常生理功能的维持,以及肝脏疾病的发生和发展有非常重要的作用。蛋白质一蛋白质相互作用是一切生命活动的基础,揭示相互作用规律是认识生命奥秘的必经之路。酵母双杂交技术是目前应用最成功的大规模研究蛋白质相互作用的技术平台,规模化酵母双杂交技术不是常规实验室酵母双杂交技术在诱饵数量上的简单增加,需要解决大量的技术问题。 为加深对凋亡调控分子机制的理解,本文在系统分析凋亡相关文献的基础上,选择21个肝脏表达的凋亡相关重要蛋白为研究对象,在优化规模化酵母双杂交技术实验条件的前提下,对所选诱饵蛋白的相互作用蛋白进行规模化发掘,为更大规模研究蛋白质相互作用提供可借鉴的经验,并发现多种可能具有重要意义的相互作用,有望丰富对凋亡调控信号通路以及细胞死亡后清除机制的了解,同时可能为疾病的诊断治疗提供新靶点。本文构建了21个重要凋亡相关诱饵载体,并利用westernblot验证了这21个诱饵蛋白在酵母细胞MaV203中的表达。通过规模化筛选和发掘得到71对高可信度的相互作用(去除冗余),其中有八对是已经报道过的相互作用,证明了系统的可靠性。通过HPRD、STRING、Pubmed、googlescholar等数据库的分析,以及GO分类、mRNA共表达以及相互作用结构域分析等生物信息学的分析,一方面提示了相互作用网络的可靠性,另一方面提示可能发现了凋亡在氨基酸、脂肪、乙醇等物质代谢、RNA剪接、泛素化调控等方面的多种新的具有重要意义的相互作用。随后我们挑选了重要相互作用DAXX和TRAF3进行了CO-IP验证及相互作用结构域分析。CO-IP实验结果表明,在HEPG2细胞中,DAXX和TRAF3能发生相互作用。通过p—gal实验对两者相互作用结构域进行了分析,结果表明TRAF3通过TRAF结构域与DAXX相互作用。进一步证实了系统的可靠性,同时也为DAXX的功能研究奠定了基础。
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