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恶性胶质瘤相关基因表达变化的研究
中文名称: 恶性胶质瘤相关基因表达变化的研究
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论文编号: 3122196收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Research on the Expression Change of Glioblastoma Development Relative Genes
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 神经外科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 胶质瘤 基因表达谱 动物模型 垂体瘤转化基因 反义寡核苷酸 恶性胶质瘤 相关基因
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论文简介:胶质瘤的演进是一个多因素、多阶段、涉及多基因的病理过程。目前有关胶质瘤发生、发展的机制,尤其是演变过程中的基因表达变化知之甚少,因此找出胶质瘤的致病基因,进行针对性的防治是彻底治愈这种顽疾的根本途径。利用基因芯片技术分析基因在系统水平的调控机制,是当前功能基因组学的重要研究手段,它明显优于过去的单一基因研究模式,可以在整体的、基因组的水平对基因的表达调控网络机制,进行系统、全面地分析,最后找出在这个功能调控网络中的关键基因。本文基因芯片技术建立起恶性胶质瘤相关基因表达谱,并对候选基因作了初步的数据库检索,最后挑选出具有潜在应用价值的垂体瘤转化基因(pituitarytumor-transforminggene,PTTG);在细胞水平,蛋白质水平,基因水平进行进一步的研究。研究证实PTTG基因在恶性胶质瘤中阳性表达并且和恶性胶质瘤的进展相关。 第一部分基因芯片技术筛选胶质瘤恶性相关基因 目的:本研究首先利用基因芯片技术对人类恶性胶质瘤及其瘤旁组织进行基因芯片分析,建立恶性胶质瘤的基因表达图谱,作系统的聚类分析,分析其差异表达基因,并对差异表达基因作广泛的生物信息学数据库检索,筛选与恶性胶质瘤相关的基因,从而在基因水平上整体揭示恶性胶质瘤的生物学行为,为进一步的深入研究提供思路和方向。方法:采用上海生物工程有限公司提供的含13824个基因位点的的人类基因表达谱芯片(SBC-R-HC一100-20)对重庆医科大学附属第一医院神经外科2003年6一12月间的23例WHOIII级和WHOIV级的胶质瘤和相应的瘤周组织进行检测,取基因芯片扫描信号两点间比值的自然对数的绝对值>0.69(基因表达变化在2倍以上)的基因为差异表达基因,建立恶性胶质瘤基因表达图谱。同时我们收集部分WHOIII级和WHOIV级的胶质瘤和相应的瘤周组织对部分筛选出的基因进行RT-PCR检测验证。结果:筛选出包括与DNA结合、转录和转录因子、蛋白质翻译、细胞周期、转移等相关的表达差异的基因共275个,其中143个表达上调,132个表达下调。通过RT-PCR验证PTTG在WHOIII级和WHOIV级的胶质瘤和相应的瘤周组织中差异表达。结论:⑴恶性胶质瘤的发生过程中存许多基因表达的改变。⑵基因芯片技术应用于恶性胶质瘤演化相关基因的研究,可以有效地筛选出目的基因进行深入研究。PTTG在WHOIII级和WHOIV级的胶质瘤和相应的瘤周组织中差异表达,有可能成为胶质瘤研究的重点。 第二部分垂体瘤转化基因在恶性胶质瘤中的表达及意义 目的:通过研究垂体瘤转化基因在恶性胶质瘤不同时期中的表达、和凋亡,增值的关系,探讨垂体瘤转化基因在恶性胶质瘤演变中的生物学意义。方法:在本课题的第一部分,我们利用基因芯片技术发现PTTG基因在胶质瘤和瘤旁组织中差异表达,并且经过RT-PCR检测证实,因此我们推测PTTG和恶性胶质瘤的进展相关,所以我们运用SD大鼠C6胶质瘤动物模型模拟恶性胶质瘤的生物学特点,比较恶性胶质瘤发展的各个时期中PTTG基因的表达情况,为临床研究提供基础资料。运用免疫组化,原位杂交,RT-PCR方法比较恶性胶质瘤模型1,2,3,4周的PTTG表达情况,及其和胶质瘤增值和凋亡之间的关系。结果:PTTT蛋白和PTTGmRNA主要表达在胶质瘤细胞的细胞质中,PTTGmRNA和蛋白质的表达水平和恶性胶质瘤的发展成正相关和恶性胶质瘤的增值活性相关。结论:PTTG随着恶性胶质瘤的发展表达增高,其发展水平与恶性胶质瘤的增殖活性正相关,其表达水平可用于评价恶性胶质瘤的恶性发展水平。 第三部分垂体瘤转化基因反义寡核苷酸抑制恶性胶质癌增殖的初步试验研究 目的:在第二部分研究的基础上用硫代修饰的PTTG反义寡核苷酸干扰SD大鼠C6胶质瘤模型肿瘤区域的PTTG基因的表达,抑制胶质瘤的增殖从而达到治疗恶性胶质瘤的目的,是对恶性胶质瘤基因生物治疗的一次尝试。 方法:利用合成的PTTG反义cDNA干扰胶质瘤中PTTG基因的表达,分为不同剂量和不同时间组立体定向注射于胶质瘤模型的肿瘤区域,比较在同一时间内内恶性胶质瘤模型的成瘤情况。结果:干扰恶性胶质瘤中PTIG的表达有效抑制了恶性胶质瘤的生长。结论:PTTG反义寡核苷酸可以抑制恶性胶质瘤的增值。
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