免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
内毒素血症巨噬细胞HMGB1的表达及丙酮酸乙酯对其的抑制作用
中文名称: 内毒素血症巨噬细胞HMGB1的表达及丙酮酸乙酯对其的抑制作用
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3122175收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Expression of HMGB1 and the Depressant Effect of Ethyl Pyruvate in Endotoxin-Stimulated Macrophages
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 外科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 高迁移率族蛋白B1 脓毒症 丙酮酸乙酯 内毒素血症 培养细胞 免疫荧光染色 激光共聚焦显微镜
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:方法: 1.LPS诱导巨噬细胞HMGBl表达及其分子机制探讨 用100ng/ml的LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7,分别于LPS刺激后0、6、12、l8、24、30、36和48h,收集细胞培养上清,用Westernblot检测细胞培养上清中HMGBl蛋白的含量;提取培养细胞总RNA,用RT-PCR扩增,检测培养细胞中HMGBl的mRNA表达情况;提取培养细胞细胞浆和细胞核蛋白,用Westernblot检测细胞浆和细胞核内HMGBl蛋白的含量;作细胞爬片行免疫细胞化学、免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后不同时间培养细胞细胞浆和细胞核内HMGBl的含量变化和转位情况。 用100ng/m1的LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7,分别于LPS刺激后0、1、2、4和6h,收集细胞培养上清,用酶联免疫吸附实验(Enzymelinkedimmunoassay,ELISA)测定细胞培养上清中TNF-ct、IL-6的含量;作细胞爬片行免疫细胞化学、免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后不同时间培养细胞NF-rd3、p38MAPK的活性变化和CBP的含量变化。 2.丙酮酸乙酯抑制LPS诱导巨噬细胞HMGBl表达的分子机制 分别采用l00ng/ml的LPS、l00ng/m1的LPS+丙酮酸乙酯刺激小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7,于刺激后O、6、12、18、24、30、36和48h,用Westernblot检测细胞培养上清HMGBl蛋白的含量;提取培养细胞总RNA,用RT-PCR扩增,检测培养细胞中HMGBl的mRNA表达情况;提取培养细胞细胞浆和细胞核蛋白,用Westernblot检测细胞浆和细胞核内HMGBl蛋白的含量;作细胞爬片行免疫细胞化学、免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察刺激后不同时间培养细胞细胞浆和细胞核内HMGBl的含量变化和转位情况。 分别采用100ng/ml的LPS、100ng/m1的LPS+丙酮酸乙酯刺激小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7,于刺激后0、1、2、4和6h,收集细胞培养上清,用ELISA测定细胞培养上清中rNF-a、IL一6的含量;作细胞爬片行免疫细胞化学、免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后不同时间培养细胞NF-r.B、p38MAPK的活性变化和CBP的含量变化。 3.H1VIGBl在脓毒症患者血液和肝组织中的表达 抽取脓毒症患者外周静脉血,用淋巴细胞分离液分离出脓毒症患者外周血单个核细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增,检测脓毒症患者外周血单个核细胞中HMGBl的mRNA表达情况;吸取外周血血清,用Westernblot检测脓毒症患者外周血血清中HMGBl蛋白的含量;用ELISA测定血清中TNF-(1、IL-6的含量。 取典型的脓毒症一急性梗阻性化脓性胆管炎患者术前和术后外周静脉血,用淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增,检测术前和术后外周血单个核细胞中HMGBl的mRNA表达情况;用Westernblot检测术前和术后外周血血清中HMGBl蛋白的含量;用ELISA测定血清中TNF-(g、IL-6的含量。切取急性化脓性梗阻性胆管炎患者肝组织,提取总RNA,用RT-PCR扩增,检测肝组织中HMGBl的mRNA表达情况;用细胞蛋白提取液提取肝组织中的总蛋白,用Westernblot检测肝组织中HMGBl蛋白的含量;取部分肝组织作组织切片行免疫组织化学、免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察肝组织中HMGBl蛋白的表达情况。 结果: 1.LPS诱导巨噬细胞HMGBl表达及其分子机制探讨 用100ng/mlLPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7,0—12h细胞培养上清中无法检测到HMGBl蛋白表达,18h后细胞培养上清中HMGBl蛋白的含量逐渐增加,24h达到高峰,以后稳定维持在较高水平,18-36h与O一12h相比增加59%、62%、68%、69%(P<0.01)。LPS刺激后Oh,胞核中HMGBl蛋白含量较高,12-24h细胞核内HMGBl含量逐渐减少,与Oh相比有显著性差异(P<0.01);30h后细胞核内HMGBl含量又逐渐增多,与12-24h相比有显著性差异(P<0.01)。免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察显示,LPS刺激后Oh,细胞浆呈弱的绿色荧光染色,6h后细胞浆中荧光染色开始增强,12-48h培养细胞的细胞浆内呈强的绿色荧光染色。LPS刺激后Oh,荧光染色主要集中在培养细胞的细胞核,细胞核呈强的绿色荧光染色;6h后培养细胞的细胞核内荧光染色逐渐减弱,到24h培养细胞的细胞核内呈弱的绿色荧光染色;30-48h细胞核内荧光染色逐渐增强。 RT-PCR结果显示,LPS刺激后O.18h,培养细胞中HMGBl的mRNA表达量无明显变化,24-36h培养细胞中HMGBl的mRNA表达量比O一18h增加47%、49%、51%(P<0.01)。 ELISA结果显示,LPS刺激后lh,细胞培养上清中TNF-ct、IL-6的含量明显增高,2h达到高峰,与Oh相比,有显著性差异(P<0.01)。 用免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后培养细胞内NF-r,B的转位变化,结果显示,用LPS刺激后Oh,培养细胞内NF-r,B主要位于细胞浆内,细胞浆内呈强的绿色荧光染色,细胞核内荧光染色弱,l一6h,细胞核内荧光染色逐渐增强,NF-rd3逐渐由细胞浆转位到细胞核,表明LPS激活NF-r,B,激活后的NF-rd3由细胞浆转位到细胞核,进一步激活下游因子。 用免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后培养细胞内磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)的含量变化,以代表p38MAPK的活性变化。结果显示,p-p38MAPK主要位于细胞浆内,LPS刺激后O、1、2、4和6h,培养细胞内绿色荧光染色逐渐增强,表明LPS刺激后,通过一系列信号转导,激活p38MAPK,通过p38MAPK途径,进一步激活HMGB1,引起细胞内HMGBl的表达和释放增加。 用免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后培养细胞内CBP含量的变化,结果显示,CBP主要位于细胞核内。LPS刺激后O、1、2、4和6h,培养细胞核内CBP绿色荧光染色逐渐增强,表明LPS刺激后养细胞核内CBP的表达明显增强。 2.丙酮酸乙酯抑制LPS诱导巨噬细胞I:!MGBl表达的分子机制 分别采用LPS、LPS+丙酮酸乙酯刺激小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7,于刺激后0、6、12、l8、24、30、36和48h测定培养细胞HMGBl基因和蛋白的表达和释放情况,结果显示,用LPS+丙酮酸乙酯刺激后,细胞培养上清HMGBl的含量较单独用LPS刺激组明显减少(P<0.01);LPS+丙酮酸乙酯组细胞胞浆内HMGBl蛋白含量明显低于LPS组(P<0.01),细胞核内HMGBl蛋白含量明显高于LPS组(P<0.01):RT-PCR结果显示,24-36h的LPS+丙酮酸乙酯组细胞内HMGBlmRNA水平较LPS组明显降低(P<0.01);免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察结果显示,刺激后12-24h,LPS+丙酮酸乙酯组细胞浆内绿色荧光染色明显弱于LPS组(P<0.01),细胞核内绿色荧光染色明显强于LPS组(P<0.01)。 分别采用LPS、LPS+丙酮酸乙酯刺激小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7后0、1、2、4和6h后,收集细胞培养上清,用ELISA测定细胞培养上清中TNF-0t、IL-6的含量,结果显示,刺激后l一6h,在相同的时间点,LPS+丙酮酸乙酯组细胞培养上清中TNF-ot、IL-6的含量明显低于LPS组(P<0.01)。 用免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察培养细胞NF-r,B、p38MAPK的活性变化,CBP的含量变化,结果显示: 培养细胞内NF-r,B的活性变化:刺激后1—6h,在相同的时间点,LPS+丙酮酸乙酯组细胞核内绿色荧光染色明显弱于LPS组(P<0.01);培养细胞内p38MAPK的活性变化:刺激后1—6h,在相同的时间点,LPS+丙酮酸乙酯组细胞浆内绿色荧光染色明显弱于LPS组(P<0.01): 培养细胞内CBP的含量变化:刺激后l一6h,在相同的时间点,LPS+丙酮酸乙酯组细胞核内绿色荧光染色明显弱于LPS组(P<0.01)。 3.1tMGBl在脓毒症患者血液和肝组织中的表达 Westernblot检测结果显示,脓毒症患者外周血血清中HMGBl蛋白的含量比正常对照明显增高(P<0.01);治疗后随着病情好转,血清中HMGBl蛋白的含量逐渐降低;在危重症病例和死亡病例中,血清中HMGBl蛋白的含量持续增高;在典型的脓毒症.急性梗阻性化脓性胆管炎患者中,外周血血清中HMGBl蛋白的含量比正常对照明显增高(P<0.01),肝组织中HMGBl蛋白的含量明显高于正常对照的肝组织(P<0.01),胆道引流术后血清中HMGBl蛋白的含量逐渐降1氐。
本类相关论文:
·生长抑素作为全身炎症反应放大的内源性保护因素研
·心肺复苏后大鼠脑线粒体通透性转换孔改变在脑损伤
·稳定核素示踪法应用于内毒素诱导兔高代谢脓毒症的
·光量子干预早期内毒素血症大鼠的实验研究
·高迁移率族蛋白B1对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的
·脓毒症时一氧化氮在肺脏和心脏中的损伤作用及其机
·卡巴胆碱对大鼠肠上皮细胞缺血再灌流和氧化应激损
·内毒素血症致多器官功能不全时大鼠心、肾功能改变
·急性重度失血性休克条件下大鼠血浆和肝脏蛋白质组
·脾脏树突状细胞在多器官障碍综合征炎症反应机制中
高迁移率族蛋白B1论文 脓毒症论文
·浅低温心脏不停跳手术减轻术后肺损伤机制及对高迁
·乌司他丁对单肺通气患者血清HMGB1、TNF-
·高迁移率族蛋白B1和α平滑肌肌动蛋白在新生鼠支
·HMGB1酸性尾端抗菌相关功能位点解析及以该分
·基于血栓调节蛋白的抗炎措施研究
·脓毒症AKI时肾组织细胞凋亡及与TLR4/9通
·脓毒症肠功能障碍与中医证型及临床预后相关性研究
·单核细胞趋化蛋白-1在脓毒症患儿血浆中的表达及
·脓毒症中医证候分布规律及临床路径的评价研究
·脓毒症三焦证候特点的临床研究
丙酮酸乙酯论文 内毒素血症论文
·介孔碳材料负载铂催化剂及氧化铝包埋铂催化剂的制
·手性修饰的有序介孔碳材料负载型铂催化剂上alp
·丙酮酸乙酯对癫痫持续状态大鼠神经元凋亡及XIA
·胰蛋白酶原激活肽与高迁徙率族蛋白1在急性胰腺炎
·高迁移率族蛋白B1在重症急性胰腺炎内皮细胞活化
·小檗碱对肠黏膜屏障中上皮紧密连接作用的研究
·肝毒清颗粒对内毒素血症肝损伤大鼠蛋白质谱表达的
·结肠透析联合赤芍承气汤保留灌肠治疗慢性重型乙型
·清热解毒凉血化瘀法对内毒素肝损伤大鼠蛋白质表达
·小檗碱和育亨宾抑制小鼠内毒素性心功能障碍的机制
培养细胞论文 免疫荧光染色论文
·家蚕中肠和培养细胞的蛋白质组学研究
·日本沼虾细胞培养
·脐血单个核细胞体外诱导树突状细胞及其抗肿瘤效应
·用简单微加工基底进行细胞微图型化的初步探索
·水杨酸调节怀槐培养细胞合成异黄酮与碳氮代谢的关
·绵羊精原干细胞标记分子CDH1多克隆抗体的制备
·猪克隆胚胎生产技术及组蛋白乙酰化免疫荧光染色技
·间歇性缺氧条件下幼鼠下丘脑视上核ADH神经元的
·出生后哺乳动物胃肠道Cajal细胞的发育生物学
·神经调节素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用
  推荐期刊投稿
·外语与外语教学
·兰州学刊
·生物多样性
·中国制造业信息化
·长春金融高等专科学校学报
·海峡科学
·北京工业职业技术学院学报
·文学与人生
·吐哈油气
·世界博览(看中国)
 
·南京邮电大学学报(自然科学版)
·建筑技术
·河南电力
·中国涂料
·福建水产
·广东商学院学报
·土壤通报
·中外医疗
·物探与化探
·离子交换与吸附
 
·时代英语(高三)
·科技文萃
·临床麻醉学杂志
·河北审计
·中国城乡企业卫生
·小型微型计算机系统
·中国社区医师
·安徽教育学院学报(自然科学版)
·电子科技
·北京林业大学学报(社会科学版)
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号