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苏氨酸、异亮氨酸立体异构体的手性色谱分离及其在哺乳动物体内分布的研究
中文名称: 苏氨酸、异亮氨酸立体异构体的手性色谱分离及其在哺乳动物体内分布的研究
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论文编号: 3122169收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Determination of the Four Threonine Isomers and Isoleucine in Mammals
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床检验诊断学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 苏氨酸 异苏氨酸 异亮氨酸 别异亮氨酸 手性色谱分离 哺乳动物 体内分布
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论文简介:近十年来,有关D一丝氨酸和D一天门冬氨酸的存在、分布和重要的生理作用被广泛和深入地研究,此外大约1O种其它的D一型氨基酸也被发现存在于各种动物体内,其生理作用的研究也正在进行中。但已被报道的这些存在于动物体内的D一型氨基酸,都只有一个手性中心,一对对映异构体,而八个必需氨基酸中苏氨酸和异亮氨酸都有两个手性中心,四个立体异构体(两对对映异构体)。为了研究哺乳动物体内苏氨酸和异亮氨酸的四个立体异构体的分布,本文分别建立了二维液相色谱法分离、分析苏氨酸的四个立体异构体和柱前手性衍生化一反相高效液相色谱法分离、分析异亮氨酸的四个立体异构体。 苏氨酸立体异构体的分析方法包括:⒈用4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxdiazole(NBD-F)将氨基酸衍生化;⒉用反相高效液相色谱法分离出苏氨酸和异苏氨酸衍生物(NBD-Thr,NBD-allo-Thr);⒊再用手性固定相色谱分离D一苏氨酸和L一苏氨酸衍生物(NBD-D-Thr,NBD-L-Thr)以及D一异苏氨酸和L一异苏氨酸衍生物(NBD-D-allo-Thr,NBD-L-allo-Thr);并用荧光检测器检测。对该分析方法的线性关系考查结果显示,D一苏氨酸、D一异苏氨酸和L一异苏氨酸在0.0025.5pmol的范围内,相关系数均为1.000;L一苏氨酸在0.05-50pmol的范围内,相关系数也为1.000。对生物样品进行定量分析的日内及曰间精密度大约5%。用此方法对大鼠体内12种组织和体液中苏氨酸异构体的分布进行了研究,结果在尿样和前脑组织中发现除L一苏氨酸外(L-Thr),D一苏氨酸(D-Thr)和D一异苏氨酸(D-allo-Thr)也同时存在,且D一异苏氨酸(D-allo-Thr)的浓度高于D一苏氨酸(D-Thr),组织和体液中均未检测到L一异苏氨酸(L-allo-Thr)。在正常人的尿液中也检测到D一苏氨酸(D-Thr)(1.33+0.54pmol/L)和D一异苏氨酸(D-allo-Thr)(9.54+4.82gmol/L)存在。 为了研究异亮氨酸的四个立体异构体的体内分布,本文建立了用邻苯二甲醛(OPA)和N一乙酰-L-半胱氨酸(NAC)为手性衍生化试剂,柱前手性衍生化一反相高效液相色谱法分离生物样品中异亮氨酸的四个立体异构体,并以电喷雾电离质谱(ESI-MS)进行检测的高灵敏度的分析方法。该分析方法对D一异亮氨酸(D-Ile)、D一别异亮氨酸(D-allo-Ile)和L一别异亮氨酸(L-allo-Ile)在5—500ng的范围内,相关系数分别为0.9967、0.9968和0.9993;对L一异亮氨酸(L-Ile)在50ng-5μg的范围内,相关系数为0.9990。用此方法在正常人血浆中检测出了L一异亮氨酸(L-lie)(204_+113.8mg/L)和L一别异亮氨酸(L-allo-Ile)(1.16+0.71mg/L),在正常人尿样中检测出了L一异亮氨酸(L-lie)(6.10+_2.24mg/L)和D一别异亮氨酸(D-allo-Ile)(0.53-+0.17mgm)。
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