免费论文
收费论文
发表论文
我要投稿
设为首页 招标网
联系我们
经济学|管理学|法学|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多 经济学|管理学|法律|计算机|医学|教育|文学|政治|艺术|哲学|更多
 论文搜索
  推荐服务: 论文发表 收费论文
期刊论文格式
毕业论文格式
期刊论文范文
毕业论文范文
论文致谢
毕业论文答辩
开题报告
论文选题
英文摘要书写
dUTP焦磷酸酶在大肠癌演化中的作用
中文名称: dUTP焦磷酸酶在大肠癌演化中的作用
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  
论文编号: 3122090收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Role of dUTPase in the Development of Colorectal Tumor
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 内科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: dUTPase 差异表达 RNAi 载体构建 生物学行为 大肠癌 蛋白表达
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
全文提供: 购买充值卡,就可下载本篇论文全文  

       论文发表:快速、低价、包过!发表论文就找论文天下

论文简介:背景与目的 dUTP焦磷酸酶(deoxyuridinetriphosphatenucleotedohydrolase,dUTPase)是体内-种重要的水解酶,基本功能是把dUTP水解成dUMP和焦磷酸(pyrophosphoricacid,PPi),不但可为DNA的合成提供原料,还可降低细胞内dUTP的浓度以降低DNA突变的频率,维持细胞遗传的稳定。dUTPase编码两种同工酶:线粒体型DUT-M和细胞核型DUT-N,DUT-M在非分裂、代谢活跃的细胞内表达,DUT-N则受细胞周期的调节。dUTPase在细胞内的表达依赖于细胞周期的调节,分化能力高的细胞dUTPase活性相对水平较高,处于分化后期或不分化的细胞的dUTPase活性则较低。对大肠癌的研究发现大肠癌细胞SW620的dUTPase的活性比HT29高4.4倍,而大肠癌细胞HT29转染dUTPase基因后活性增加,表现出对FUdR的耐药性。 材料和方法 1选取四种不同病理组织来源的大肠癌细胞株LoVo、SW620、SW480和SW1116为研究对象,检验这四种细胞的粘附性以证实它们的生物学特性差异。应用半定量逆转录聚合酶链式反应(Reversetranspcriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹(WesternBlottingWB)从mRNA和蛋白表达两个水平检测dUTPase的差异表达,显色反应验证这四种细胞株中dUTPase的活性差别,应用免疫细胞化学染色确定dUTPase在细胞内的定位,并进一步证实dUTPase在细胞内的表达差异。 2免疫组织化学检测不同分期大肠癌和大肠息肉患者的dUTPase表达,RT-PCR检测DukesB和C期的大肠癌患者的dUTPasemRNA表达,探讨dUTPase表达与大肠癌病理学的特点的关系。 3针对dUTPase的基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)真核转染dUTPase表达较高的SW620细胞后,筛选出稳定表达的细胞株,用RT-PCR和WesternBlot检验干扰效果,异质粘附实验证实dUTPase表达下调后的细胞粘附性的改变,生长曲线、MTT观测细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡的变化,小室法和划痕法检测细胞侵袭力和迁移力改变,并进行体内动物实验观察肿瘤致瘤性、侵袭和转移能力的差异,来进一步分析dUTPase对大肠癌细胞的生物学特性的影响。 结果 1、大肠癌细胞株LoVo、SW620、SW480和SW1116中dUTPase的差异表达 ⒈大肠癌细胞株LoVo、SW620、SW480和SW1116的粘附性差异 ⒉半定量RT-PCR检测LoVo、SW620、SW480和SW1116的dUTPasemRNA表达水平 ⒊WesternBlotting检测LoVo、SW620、SW480和SW1116的dUTPase蛋白表达 ⒋显色反应检测LoVo、SW620、SW480和SW1116的dUTPase的活性 ⒌应用免疫细胞化学进行dUTPase的细胞内定位 2、不同分期大肠癌患者的dUTPase表达 ⒈dUTPase在大肠良、恶性病变的表达 大肠癌癌旁组织粘膜中dUTPase的表达极少,偶尔在隐窝的基底部有弱阳性细胞。大肠息肉中dUTPase的表达呈弱阳性,阳性细胞占细胞总数的5%-20%,自绒毛基底至顶端均有分布,有簇状倾向。大肠癌中dUTPase表达明显增高,阳性细胞不规则地散乱分布或比较密集地灶性分布,与细胞总数的比例为10%-80%。 ⒉dUTPase在大肠癌的表达与临床病理学的关系 进一步探讨大肠癌组织中dUTPase的表达与其临床特点的关系,发现高分化的大肠癌与低分化的大肠癌相比dUTPase强阳性的表达率有显著性差异(P<0.05),提示低分化的大肠癌组织中dUTPase表达更明显。侵润深度的不同的大肠癌dUTPase的表达也有显著性差异(P<0.001),侵润至浆膜的肿瘤组织中dUTPase的表达高于侵润至肌层的大肠癌,提示侵润程度较深的大肠癌组织中dUTPase表达更明显。 ⒊不同分期的大肠癌的dUTPasemRNA表达的差异 无转移的DukesB期大肠癌组织内可见dUTPasemRNA的相对较低表达,dUTPase/β-actin为1.54±0.20。有转移的DukesC期大肠癌组织内dUTPasemRNA水平明显升高,dUTPase/β-actin为2.37±0.17,为无转移大肠肿瘤组织的1.5倍,差异有显著性(P<0.01)。提示不同分期的大肠癌组织中的dUTPasemRNA表达有显著性差异。 3、RNA沉默dUTPase表达对SW620细胞生物学特性的影响 ⒈成功地构建了两个dUTPase发夹siRNA的真核表达载体sidUTPase/pSilenCircle和无关基因重组质粒siFly/pSilenCircle ⒉以上述重组质粒分别转染SW620细胞,并进行抗性筛选和干扰效果的鉴定 ⒊RNAi后SW620细胞生物学特性的变化 异质粘附实验的粘附细胞计数结果显示三个细胞株总体粘附性有差异。其中,p-shRNA1-SW620粘附细胞数明显少于SW620(P<0.001)和p-sifly-SW620(P<0.001),后两组的粘附细胞数差别不明显(P>0.05),提示与SW620和p-sifly-SW620相比较,p-shRNA1-SW620的细胞-基质粘附能力显著降低。生长曲线显示与SW620和p-sifly-SW620相比较,p-shRNA1-SW620细胞的生长速度明显下降。MTT检测细胞活力显示p-shRNA1-SW620细胞的吸光值为0.78±0.10,SW620细胞为1.14±0.17,p-sifly-SW620细胞为1.07±0.21,p-shRNA1-SW620细胞与SW620细胞和p-sifly-SW620细胞相比P<0.001,p-sifly-SW620与SW620相比P>0.05,提示p-shRNA1-SW620细胞增殖受到一定抑制作用,生长繁殖减慢。 ⒋RNAi后细胞PPARγ和NF-κB表达的变化 RT-PCR检测三个细胞株PPARγ的mRNA表达,发现p-shRNA1-SW620的PPARγ与B-actin的相对表达量(PPARγ/β-actin)与p-sifly-SW620和SW620相比P<0.01,p-sifly-SW620与SW620相比P>0.05,提示RNAi沉默dUTPase表达后p-shRNA1-SW620细胞内PPARγmRNA的表达增高。Westernblotting检测显示p-shRNA1-SW620细胞内PPARγ蛋白水平较SW620细胞增高,而p-sifly-SW620细胞内PPARγ蛋白的表达量与SW620相比无明显改变,提示RNAi沉默dUTPase表达后p-shRNA1-SW620细胞内PPARγ蛋白表达增高。EMSA显示空白对照组SW620细胞表现较高的NF-κB活性,p-shRNA1-SW620活性明显降低,而p-sifly-SW620与SW620相比NF-κB序列结合活性无明显变化,提示RNAi沉默dUTPase表达后p-shRNA1-SW620细胞内NF-κB活性明显降低。 结论 1、四种不同病理组织来源的大肠癌细胞株LoVo、SW620、SW480和SW1116异质粘附实验证实它们之间有粘附性差异,其中LoVo、SW620的粘附性明显高于SW480和SW1116。 2、应用RT-PCR和WesternBlotting从mRNA和蛋白表达两个水平检测dUTPase的差异表达,提示dUTPase在SW620和LoVo细胞的mRNA和蛋白表达高于SW480和SW1116细胞。 3、免疫组织化学表明大肠癌和大肠息肉的dUTPase阳性产物主要位于胞浆。大肠癌和大肠息肉中的dUTPase表达率高于癌旁粘膜。大肠癌和息肉的dUTPase表达强度高于癌旁粘膜,其中,大肠癌又高于大肠息肉。dUTPase的表达与大肠癌的分化程度、侵润深度、淋巴结转移相关。 4、构建的dUTPase发夹siRNA的真核表达载体sidUTPase/pSilenCircle可有效抑制大肠癌细胞SW620dUTPase的表达,降低细胞的异质粘附性,抑制细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,减弱细胞侵袭力和迁移力。 5、dUTPase可能是一个重要的肿瘤促进基因,在大肠癌的发生发展过程中起着重要的作用。
本类相关论文:
·大肠侧向发育型肿瘤差异蛋白筛选及galecti
·广东省大肠癌流行病学研究
·不同转移潜能大肠癌细胞形态和基因表达谱的差异分
·MMP9. COX-2基因多态性与大肠癌易感性
·利用组织芯片和基因芯片研究胃及大肠癌转移机制
·趋化因子受体CXCR4在大肠癌转移中作用的研究
·利用CK-19、CK-20和CEA分子标记侦测
·胰岛素样生长因子系统在大肠癌的表达及意义研究
·散发性大肠癌DNA甲基化的临床病理意义及其和遗
·国人家族性腺瘤性息肉病家系收集与保存及其临床、
差异表达论文 RNAi论文
·孕酮与干扰素-τ对体外培养的牛子宫内膜细胞基因
·根蘖型苜蓿(Medicago varia)差异
·神经干细胞与运动神经元的microRNA和蛋白
·能量限制对肉仔鸡生产性能以及肝脏基因表达的效应
·猪胸膜肺炎放线杆菌双组分调控系统ΔnarQ/n
·东亚三角涡虫DjPsa基因的鉴定、表达及功能分
·CRMP-2的磷酸化对缺血再灌注脑损伤后神经再
·慢病毒介导shRNA稳定持续抑制口蹄疫病毒增殖
·镰形扇头蜱抗凝血分子在昆虫细胞中的重组表达和R
·白沙蒿铁蛋白基因的克隆及其RNAi载体的构建
载体构建论文 生物学行为论文
·拟南芥AtCOR15a抗寒基因的抗寒性研究
·Cecropin AD在转基因苜蓿中的表达研究
·拟南芥中ATSRRK1-4的载体构建及ATSR
·白沙蒿铁蛋白基因的克隆及其RNAi载体的构建
·小黑杨FT-like基因的克隆、原核表达及植物
·骨髓间充质干细胞优化移植治疗缺血性疾病的基础研
·老年人胃癌生物学行为与外科治疗的研究(附401
·肝癌生物学行为活体分子显像的基础实验研究
·SOX9基因沉默对大肠癌细胞系生物学行为的影响
·一氧化氮对兔纤维环细胞生物学行为的影响
大肠癌论文 蛋白表达论文
·BAG-1在大肠癌中的表达与临床意义
·RNAi靶向人端粒酶逆转录酶基因治疗大肠癌的实
·RNA干扰抑制Sp1对大肠癌SW480细胞端粒
·CD34、VEGF、硒蛋白-P与大肠癌的相关性
·SELDI技术联合MATLAB软件预测FOLF
·离子通道相关蛋白FXYD6的真核表达和功能区的
·肠道病毒EV71 VP1基因的优化和免疫原性的
·猪源TTV:分子流行病学,全长序列分析及感染性
·猪细小病毒四型的初步研究
·猪干扰素诱导蛋白IP-10和Mx1克隆、表达及
   免费论文
公共管理 | 法学 | 理学 | 医药学
政治 | 社会学 | 文学 | 艺术 | 哲学
工学 | 计算机 | 文化 | 英语论文
经济学 | 财政 税收 | 证券金融
管理学 | 会计审计 | 工商管理 | 教育
财务管理 | 论文写作指导 | 应用文
   收费论文
马列毛邓 | 哲学宗教 | 社会科学
政治法律 | 军 事 | 经 济
文化科学教育体育 | 语言文字
文学 | 艺术 | 历史地理 | 自然科学
数理化 | 天文 | 生物科学 | 医药卫生
农业科学 | 工业技术 | 交通运输
航空航天 | 环境安全
   浏览历史

联系论文网 | 收费论文 | 发表论文 | 论文翻译 | 友情链接 | 全部分类 | 网站地图 | 期刊导航
版权所有 2008-2018 论文天下 www.lunwentianxia.com 京ICP备08104503号