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乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血模型神经细胞保护效应及其机制的研究
中文名称: 乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血模型神经细胞保护效应及其机制的研究
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论文编号: 3122066收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Protective Effects and Mechanisms of WuLongDan Against Neuronal Injury in Rat Focal Cerebral Ischemia Model
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 中西医结合临床
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 乌龙丹 缺血性脑血管病 神经元保护 臧堃堂 学术思想 局灶性脑缺血 神经细胞保护
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论文简介:本研究的主要内容框架为下: 1.2传统医学对脑缺血神经细胞损伤机制与治疗的探讨 传统医学认为脑缺血后神经元损害是中风病理变化过程的一部分,近现代医家普遍认为中风的发病机制为肝阳化风、气血并逆、直冲犯脑。导师臧堃堂教授认为缺血性脑血管病的受病部位在脉管与脑髓,尤以脉管的病变为其关键,气血不足与血脉瘀阻是病机的主要方面,与诸脏腑经络的病变及中风后的痰饮瘀毒、正气亏虚三者之间又有因果的关系。概之,本病病机主要为各种内外病因致诸脏腑经络之病变,殃及脑部脉管与脑髓,产生痰饮瘀毒及正气亏虚等病理变化过程,主张以益气活血、养阴补肾、化瘀通络为其治疗要点。 1.3乌龙丹治疗缺血性脑血管病的临床与理论基础 根据对缺血性脑血管病的病因病机理解,臧堃堂教授从益气活血、养阴补肾、化瘀通络法拟制出经验方乌龙丹治疗本病,全方由生黄芪、葛根、生晒参、白术、制首乌、川芎、当归、丹参、地龙、全蝎、制僵蚕、水蛭、石菖蒲、女贞子等十四味药组成,其组方用药主要从两方面着手:脉管病变为气血亏虚与血脉瘀阻,故治用大剂量的生黄芪、生晒参、白术大补脾胃之气,扶后天以助化机,益气以生血;丹参、当归、川芎、地龙、水蛭养血活血、化瘀通络,配用葛根以鼓动气血上行进入脑缺血区以祛瘀生新。脑髓病变为髓海亏虚与痰饮瘀毒,故治用制首乌、女贞子养阴补肾填髓,僵蚕、全蝎、石菖蒲平肝熄风解痉、祛痰开窍。以上诸药合用共奏益气活血、养阴补肾、化瘀通络之功,从而达到治疗缺血性脑血管病的目的。本课题组前期的临床研究表明乌龙丹治疗缺血性脑血管病临床疗效显著,实验研究也表明有多方面的药理作用,能从不同途径改善脑缺血后的病理变化,为本课题从神经元保护角度探讨乌龙丹治疗缺血性脑血管病的研究提供了理论依据。 2实验研究 采用实验手段,探讨乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血模型神经细胞保护效应及其机制。由于本课题组前期已对乌龙丹做了大量的研究,因而制定乌龙丹的制备与质量标准是进一步研究的基础。本研究在制定了乌龙丹质量标准,并复制了大鼠局灶性脑缺血病理模型的基础上,将实验动物wistar大鼠(3-4月龄,250±20g),分为假手术组、模型组、乌龙丹高剂量组、乌龙丹中剂量组、乌龙丹低剂量组。各组先予灌胃给药一周,三实验组给予乌龙丹流浸膏,每日给药剂量分别为1ml、2ml、4ml(1ml≈2.5g生药含量),假手术组与模型组给予生理盐水2ml。于末次给药后2h造模,术后连续给药,大鼠造模24h后作相应处理,提取样本,进行各项检测实验。 2.1探讨乌龙丹的制备与质量标准 建立薄层色谱法对乌龙丹方中首乌、黄芪、当归、葛根、川芎等药材进行定性鉴别,结果重复性好,用高效液相色谱法对方中葛根素、人参皂苷Rg1进行含量测定,结果提取率稳定。以上实验结果表明检测葛根素、人参皂苷Rg1含量可作为乌龙丹质量控制的检测指标,为控制本品质量打下基础。 2.2建立大鼠局灶性脑缺血病理模型 采用开颅法制作大鼠局灶性脑缺血模型,结果表明成功率较高,可达90%以上,缺血效果可靠,梗塞区域恒定,其病理改变与人类缺血性中风较为接近,且手术方法简便易行,对动物损伤小,死亡率低,表明采用这一模型符合本课题进一步实验的要求。 2.3探讨乌龙丹对局灶性脑缺血神经元损伤的保护效应 运用光镜与电镜观察了各组脑组织神经细胞损害情况,光镜下可见,模型组空泡形成明显,部分神经元周围间隙扩大,神经细胞死亡多,残存细胞少,乌龙丹三剂量组神经细胞较为致密,胞浆浓缩较轻,神经细胞死亡减少。对细胞的超微结构的电镜观察发现,模型组细胞结构严重破坏,坏死与凋亡两种细胞死亡形态均出现,乌龙丹各剂量组细胞结构较完整。统计学分析表明乌龙丹能减轻大鼠局灶性脑缺血模型神经细胞的损害,对脑缺血神经细胞有保护效应。 2.4探讨乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血神经元凋亡及其相关基因表达的影响 通过免疫组化试验,计算各组神经元TUNEL染色及bcl-2、caspase-3免疫组化染色阳性细胞数,结果:与假手术组对比,模型组脑组织TUNEL染色阳性细胞、Caspase-3免疫反应阳性细胞数升高(P<0.001),Bcl-2免疫反应阳性细胞数下降(P<0.001);与模型组对比,乌龙丹三剂量组均可降低脑组织TUNEL染色阳性细胞数与Caspase-3免疫反应阳性细胞数,增加Bcl-2免疫反应阳性细胞数(P<0.001)。以上结果表明乌龙丹能通过影响凋亡相关基因的表达,对抗大鼠局灶性脑缺血后神经细胞的凋亡变化,从而产生对脑缺血后神经细胞的保护作用。 2.5探讨乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血脑组织中氧自由基的影响 对各组氧自由基相关物进行检测,其中SOD检测用黄嘌呤氧化酶法,MDA检测用TBA显色法,结果:乌龙丹能提高缺血后脑组织中SOD活性并降低MDA含量,提示乌龙丹能调控缺血后脑组织中SOD活性与MDA含量,从而减弱自由基的毒性反应。 2.6探讨乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血脑组织中兴奋性氨基酸的影响 用氨基酸分析仪测定各组兴奋性氨基酸的含量,结果:与假手术组对比,模型组脑组织Glu、Asp、Gly、GABA含量升高(Pglu=0.012,Pasp<0.001,Pgly<0.001,PGABA=0.003);与模型组对比,乌龙丹三个剂量组均可降低脑组织Glu、Asp、Gly含量(P<0.05);乌龙丹三剂量组能降低脑组织GABA含量,但差异无显著性。实验结果表明乌龙丹可调控缺血后脑组织中兴奋性氨基酸含量,拮抗兴奋性氨基酸的毒性反应,从而起到对神经细胞的保护作用。 3临床研究 臧堃堂教授是国家级名老中医,博士生导师,师承制导师,数十年的临床与教学工作,积累了宝贵的临床经验,凝集成独特的学术思想,本文揖其要从六个部分作简要介绍。 3.1“《大医精诚》,医家必读”:臧老认为入门中医学必先精读唐代大医家孙思邈之《大医精诚》论,并反复教导学生:“欲做大医者,须在精诚二字上下功夫”,须按大医精诚之内容,精研医药,全心全意为人民服务,并身体力行,以身作则,不辞艰辛,体现了名老中医首重医德医风思想。 3.2“论药处方,参酌古今”:臧老从事中药方剂教学数十载,对中药学、方剂学造诣颇深,从中药材品质的真伪优劣鉴别,饮片的如法炮制、保管调配,西药的中医认识,药对组成与应用,经方时方验方的应用,都有精辟见解与创新,其论药处方,善于参酌古今,力求全面理解掌握,体现了名老药师的治药思想与用药经验。 3.3“审因论治,衷中参西”:臧老认为不管中医西医,中药西药,能看好病的医药,就是老百姓需要的东西,就是科学。两大医学体系为人类的健康都做出了巨大贡献,临床诊治时切不可厚此薄彼、顾此失彼,力求做到衷中参西,使中西医各展已长,体现了臧老中西医结合的临床诊疗思想。 3.4“杂病治则,师宗仲景”:杂病有病机复杂、变化多的特点。臧老临床工作中推宗仲景对杂病的治疗法则,始终贯彻了治未病思想、调养脾肾思想、扶正祛邪思想,展现了臧老临证治疗特点。 3.5“临证精华,与人规矩”:癌症、中风病、湿热病是临床常见的难治病症,臧老通过数十年的临床实践,体会到扶正抗癌是治疗癌症总的纲领,主张益气活血为主治疗缺血性脑血管病,善用益气养阴法治疗阴虚湿热型病证,均能取得满意疗效,展现了臧老临证精华。 3.6“习医三要,寄语后人”:臧老认为要做名好医生,必当多临床、勤读经典、善于学习名老中医经验,表达了一代名师对后学者的殷切期望。 全文比较系统地阐述了臧老学术思想与临床经验。
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