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葡聚糖—寡胺阳离子化合物的制备及其基因转染效率的研究
中文名称: 葡聚糖—寡胺阳离子化合物的制备及其基因转染效率的研究
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论文编号: 3122050收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on the Preparation of Dextran-oligoamine Cationic Compound and the Gene Transfecting Efficiency
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 现代药剂学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 氧化葡聚糖 精胺 精脒 聚乙烯基亚胺 葡聚糖-精胺阳离子化合物纳米基因载体 基因转染
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 本研究的目的是制备具有转基因功能的葡聚糖-(略)合物基因载体,其意义在于(略)因载体,解决基因治疗的载体问题.目前用于基因治疗的病毒性载体虽然具有较高的转染效率,但其体内毒性、免疫原性等诸多缺陷限制了其应用,而安全无毒、生物相(略)毒基因载体则有望弥补病毒性载体的不足并成为基因治疗的新一代载体. 以目前非病毒基因载体中前景较好的葡聚糖-寡胺阳离子化合物为研究对象,从多种葡聚糖-寡胺阳离子化合物中优选出转染能力最强的载体,并对其进行进一步的研究,力图找出影响该化合物基因转染能力的因素和内在规律.本研究的主要研究方法、内容、结论包括以下几个方面. 首先,将分子量不同的葡聚糖10(Dextran10)、葡聚糖40(Dextran40)(略)(Dextran70)分别氧化成三种氧化度不同的氧化葡聚糖,共制备9个品种的氧化葡聚糖,并以盐酸羟胺法测定了各种氧化葡聚糖分子上的醛基含量.在预试验的基础上以载体的基因转染效率(略)通过正交试验考察影响载体转染效率的因素并优选载体的制备条件,结果氧化葡聚糖的种类、氧化葡聚糖的氧化度(醛基含量)、反应物寡胺与醛基的配比、...
The objective of the experiment is to produce the dextran-oligoamine cationic compou(omitted)high transfection efficacy. T(omitted)cance of the test is in to explore and solve the problem of gene carrier which will be used in gene therapy in the future. At present, al(omitted) virus gene carriers have higher gene transfection efficiency, they have defects,including vivo toxici(omitted)genicity and expensive et al. These defects restrict their application. On the oth(omitted)he nonvirus gene carriers ar...
目录:
摘要第3-6页
ABSTRACT第6-9页
前言第13-25页
第1章 葡聚糖-寡胺阳离子化合物纳米粒非病毒基因载体的合成第25-56页
  ·仪器与试药第25-26页
  ·基因载体的合成路线第26-27页
  ·氧化葡聚糖的制备第27-46页
    ·制备方法第28页
    ·氧化葡聚糖的分离第28-29页
    ·氧化葡聚糖的表征第29-31页
    ·氧化葡聚糖的醛基含量测定第31-42页
    ·氧化葡聚糖收率的计算第42-43页
    ·正交试验第43-45页
    ·九种氧化葡聚糖的制备第45-46页
  ·葡聚糖-寡胺阳离子化合物纳米粒基因载体的制备第46-56页
    ·基因载体的合成第46-47页
    ·载体转染效率的测定第47页
    ·基因载体的优选第47-56页
第2章 基因载体的表征第56-74页
  ·仪器与试药第56页
  ·红外光谱测定第56-60页
  ·紫外光谱测定第60-61页
  ·核磁共振测定第61-65页
  ·粒径及分布第65-66页
  ·Zeta电位测定第66页
  ·电镜形态观察第66-68页
  ·载体上含伯胺基的精胺的含量测定第68-71页
    ·试液的配制第68页
    ·标准曲线的制备第68-70页
    ·精密度试验第70页
    ·回收率测定第70-71页
    ·样品测定第71页
  ·载体上精胺的总含量测定第71-72页
  ·讨论第72页
  ·小结第72-74页
第3章 pEGFP-C_1报告基因的制备及鉴定第74-85页
  ·仪器与试药第74-75页
  ·试液的配制第75-76页
  ·重组pEGFP-C_1报告基因的转化第76页
    ·感受态细菌的制备第76页
    ·pEGFP-C1重组子的转化第76页
  ·pEGFP-C_1重组子的提取第76-77页
    ·细菌的增殖和质粒的扩增第76-77页
    ·裂解菌体,提取质粒第77页
  ·pEGFP-C_1质粒的纯化第77-78页
  ·pEGFP-C1质粒的鉴定第78-80页
  ·紫外分光光度法检测pEGFP-C1质粒的浓度和纯度第80页
  ·讨论第80-84页
  ·小结第84-85页
第4章 基因转染第85-100页
  ·仪器与试药第86页
  ·细胞培养第86-87页
    ·细胞的复苏第86页
    ·细胞的传代和细胞接种密度的确定第86-87页
  ·DNA-载体复合物的制备第87-88页
    ·定量关系的确立第87-88页
    ·制备方法第88页
  ·载体对DNA的结合压缩试验第88-89页
  ·DNA阻滞试验第89-91页
    ·DNA电泳检测浓度的确定第89-90页
    ·DNA阻滞试验第90-91页
  ·基因转染试验第91页
  ·影响载体转染效率的因素考察第91-96页
    ·载体/DNA用量比对转染效率的影响第91-94页
    ·合成反应中精胺与氧化葡聚糖醛基摩尔比对转染效率的影响第94-95页
    ·葡聚糖氧化度对转染效率的影响第95-96页
  ·讨论第96-99页
  ·小结第99-100页
全文小结第100-103页
  ·小结第100-101页
  ·创新点第101-102页
  ·本文存在的问题第102页
  ·进一步研究展望第102-103页
发表论文目录第103-110页
致谢第110-111页
学位论文原创性声明第111页
学位论文版权使用授权书第111页
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