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嗜水气单胞菌聚羟基脂肪酸酯(PHA)合成调控的初步研究
中文名称: 嗜水气单胞菌聚羟基脂肪酸酯(PHA)合成调控的初步研究
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论文编号: 3121987收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: 无英文名称
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 微生物与生化药学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 嗜水气单胞菌 PHA合酶 聚羟基脂肪酸酯 电转化
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论文摘要: 利用优化的电转化条件(电场强度为12.5 kV/Cm、脉冲时间为5 ms、电阻1000 O)转化早静止期制备的嗜水气单胞菌WQ株感受态细胞,每微克广泛宿主质粒pBBR1MCS1 DNA可获得约(略)氯霉素抗性的转化子,质粒DNA在嗜水气单胞菌中可稳定保存. PCR(略)霉素抗性基因被插入到嗜水气单胞茵Ⅰ型PHA合酶基因中间,获得带有Ⅰ型PHA合酶断裂基因的自杀质粒pFH5(6.5 kb).利用优化的电转化条件,自杀质粒pFH5 DNA转化嗜水气单胞菌感受态细胞,通过细胞内同源(略)抗性基因被整合到嗜水气单胞菌细胞的基因组上,获得嗜水气单胞菌Ⅰ型PHA合酶缺失突变株.野生型嗜水气单胞菌仅可利用月桂酸作为碳源合成PHBHHx,高浓度葡萄糖对其生长有抑制作用(略)水气单胞菌Ⅰ型PHA合酶缺失突变株具有明显不同于野生型的特点,可以以月桂酸和葡萄糖作为碳源产生中长链PHA(mcl PHA),表明在野生型嗜水气单胞菌中存在另一个功能被隐藏的Ⅱ型PHA合酶基因. 根据假单胞菌Ⅱ型PH(略)纵子区保守序列设计引物,以野生型嗜水气单胞菌基因组为模板,PCR扩增得到2...
T(omitted)a system for gene replacement in Aeromonas hydrophila, conditions wer(omitted)ystemically to develop an electroporation protocol. The optimal yield of transformant was approximately 4×10~2 CFU/μg DNA at 12.5 kV/ Cm and 1000 O, result(omitted)ime constant of approximately 5 ms. The A hydrophila transformants expressed plasmid-encoded (omitted) to chlormaphenicol. Plasmid DNA in the A hydrophila transformant was stably maintained. To our knowledge, t(omitted) first report of genetic manipulatio...
目录:
中文摘要第8-9页
Abstract第9-10页
第1章 前言第11-27页
  ·聚羟基脂肪酸酯(PHA)简介第11页
  ·PHA理化性质及可降解性第11-14页
  ·PHA的生理功能和应用第14-16页
  ·PHA的分子生物学研究第16-24页
  ·PHA研究的展望第24-25页
  ·本论文的目的与意义第25-27页
第2章 实验材料与基本实验方法第27-45页
  ·材料第27-31页
  ·常用实验操作方法第31-45页
第3章 嗜水气单胞菌电转化研究第45-52页
  ·实验目的第45页
  ·实验背景第45-46页
  ·方案设计与可行性分析第46-47页
  ·嗜水气单胞菌生长曲线确定和感受态细胞制备第47-48页
  ·不同时期制备感受态细胞的电转化研究第48页
  ·电场强度对嗜水气单胞菌电转化的影响第48-49页
  ·脉冲时间对嗜水气单胞菌电转化的影响第49-50页
  ·孵育时间对嗜水气单胞菌电转化的影响第50页
  ·讨论第50-52页
第4章 中长链PHA在嗜水气单胞菌PHA合酶缺失突变株中的合成第52-61页
  ·实验目的第52页
  ·实验背景第52-53页
  ·方案设计与可行性分析第53页
  ·自杀质粒pFH5构建第53-55页
  ·嗜水气单胞菌PHA合酶缺失突变株的获得第55页
  ·嗜水气单胞菌PHA合酶缺失突变株的鉴定第55-57页
  ·嗜水气单胞菌PHA合酶缺失突变株积累PHA研究第57-59页
  ·讨论第59-61页
第5章 嗜水气单胞菌Ⅱ型PHA合酶基因的克隆第61-76页
  ·实验目的第61页
  ·实验背景第61页
  ·方案设计第61-66页
  ·克隆实验第66-68页
  ·克隆结果与分析第68-70页
  ·PHA合酶基因的功能验证第70-74页
  ·讨论第74-75页
  ·小结第75-76页
第6章 嗜水气单胞菌PHA合酶同源性研究第76-82页
  ·实验目的第76页
  ·实验背景第76页
  ·方案设计第76-78页
  ·嗜水气单胞菌Ⅰ型和Ⅱ型PHA合酶的系统分类第78-79页
  ·嗜水气单胞菌Ⅱ型PHA合酶氨基酸序列一致性分析第79页
  ·嗜水气单胞菌Ⅱ性PHA合酶氨基酸序列的multialignment分析第79-81页
  ·讨论第81-82页
第7章 嗜水气单胞菌Ⅰ型和Ⅱ型PHA合酶基因转录分析第82-88页
  ·实验目的第82页
  ·实验背景第82-83页
  ·方案设计第83-84页
  ·嗜水气单胞菌总RNA提取与纯化第84-86页
  ·讨论第86-87页
  ·小结第87-88页
第8章 结论第88-91页
  ·嗜水气单胞菌电转化研究第88页
  ·嗜水气单胞菌Ⅰ型PHA合酶缺失突变株的获得第88-89页
  ·嗜水气单胞菌Ⅱ型PHA合酶基因克隆和功能确认第89页
  ·嗜水气单胞菌PHA合酶同源性分析第89页
  ·PHBHHx和mcl PHA合成的调节第89-91页
参考文献第91-100页
致谢第100-101页
附录第101-119页
  附录1第101-103页
  附录2第103-105页
  附录3第105-106页
  附录4第106-112页
  附录5第112-117页
  附录6第117-119页
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