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大蒜素长循环脂质体保护缺血心肌的实验研究
中文名称: 大蒜素长循环脂质体保护缺血心肌的实验研究
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论文编号: 3121856收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: 无英文名称
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 中西结合临床
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 大蒜素 长循环脂质体 心肌缺血 缺血再灌注损伤 冠心病 长循环 脂质体
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论文简介:背景:对缺血心肌的保护研究一直是心脏学科领域的重点。中药以其副作用少,多靶点起效独具优势。脂质体是理想的载药体系,把对缺血心肌有保护作用的中药与脂质体结合可望产生更好的疗效。 目的:研制大蒜素长循环脂质体,考察其保护缺血心肌的效果,探讨其保护缺血心肌的机制。 方法: 1制剂部分: ⑴脂质体的制备:用反相蒸发法制备大蒜素长循环脂质体和大蒜素脂质体两种制剂,用离心法测定脂质体的包封率,用透射电镜观察其形态,用动态激光散射法测其粒径和粒度分布,并对其稳定性作3个月观察。 ⑵考察刺激性:大白兔9只,随机分为3组,分别是大蒜素注射液组、大蒜素脂质体组和大蒜素长循环脂质体组。各组从左侧耳缘静脉、股四头肌注射或从左侧眼结膜表面滴注上述药物,用同样方法在右侧给予生理盐水作对照,观察三种制剂在末次给药10、30、60、120min、24、48h后对局部血管、肌肉、粘膜的刺激性,并作病理切片。 ⑶测定药物在缺血再灌注大鼠体内的血浆浓度和心肌组织浓度:SD大鼠18只,随机分为3组,分别是大蒜素注射液组、大蒜素脂质体组和大蒜素长循环脂质体组。各组均结扎冠脉左前降支30min,复灌3h,造成缺血再灌注模型。在复灌前15min经静脉注射药物,复灌3h后取血和左室前壁心肌组织,用反相高效液相色谱法检测血浆和心肌匀浆中大蒜素的浓度。 2药效学部分: ⑴对心肌梗死范围的影响:SD大鼠48只,随机分为6组,分别是假手术组、缺血再灌注模型组、倍他洛克组、大蒜素注射液组、大蒜素脂质体组和大蒜素长循环脂质体组。除假手术组外,其余各组均结扎冠脉左前降支30min,复灌3h,造成缺血再灌注模型。在复灌前15min,经静脉注射药物,假手术组和模型组注射生理盐水作对照。观察心肌梗死范围(梗死区面积占危险区面积的百分比)情况。 ⑵对缺血再灌注心肌形态结构的影响:分别在光学显微镜和电子显微镜下对缺血心肌的一般病理改变和超微形态结构改变进行观察。 3作用机制部分: ⑴生化机制:SD大鼠48只,随机分为6组,分组及给药操作同上。复灌3h后取血和左室前壁心肌组织,检测血浆CK、MDA、SOD、ET及心肌匀浆MPO、MDA、SOD含量。 ⑵心肌微循环:SD大鼠36只,随机分为6组,分组及给药操作同上。用可视分光组织氧饱和度监测器探测结扎冠脉左前降支前、结扎后10min、25min、复灌后5min、3h共5个时点心肌氧饱和度的变化。 结果: 1制剂部分: ⑴制备的大蒜素长循环脂质体的包封率为84.57%,平均粒径为103.9nm,电镜观察呈圆形和椭圆形,4℃放置3月无聚集或沉淀;大蒜素脂质体的包封率为87.19%,平均粒径为114.8nm,电镜观察呈圆形和椭圆形,常温下放置3月出现沉淀,4℃放置3月无聚集或沉淀。 ⑵静脉注射后,大蒜素长循环脂质体、大蒜素脂质体、大蒜素注射液分别使1只、2只、3只兔耳缘静脉出现充血现象,恢复正常时间分别为10min、10min、60min;肌肉注射后,均未见明显异常;滴眼后三者刺激反应评分分别为1.3分、2分、4分,恢复正常时间分别为60min、120min、30min。兔耳病理片结果示大蒜素注射液对照组兔耳缘静脉充盈,组织间隙水肿,血管壁及周围有白细胞浸润,而大蒜素长循环脂质体组及大蒜素脂质体组无明显异常。 ⑶静脉注射3.25h后,大蒜素长循环脂质体组、大蒜素脂质体组、大蒜素注射液组的血药浓度分别是2.94、0.09、0.07μg/ml;在心肌组织中的药物浓度未检出。 2药效学部分: ⑴缺血再灌注损伤使模型组心肌梗死区面积占危险区面积的百分比达65.50±11.79%,给予药物后该百分比下降了15.67~25%(P<0.05或P<0.01),其中大蒜素长循环脂质体组下降了19.7%(P<0.01),药物组之间无显著性差异(P>0.05); ⑵光镜观察,缺血再灌注模型组梗死心肌范围大,毛细血管膜结构破坏,心肌组织间有大量中性粒细胞浸润。大蒜素长循环脂质体组梗死心肌范围明显缩小,毛细血管膜结构清晰,心肌组织间见少量中性粒细胞浸润;电镜观察,缺血再灌注模型组缺血心肌细胞线粒体肿胀,嵴减少或消失,排列紊乱,肌丝断裂,Z线模糊,血管内皮细胞肿胀,突向管腔内,管腔外可见到中性粒细胞浸润;大蒜素长循环脂质体组缺血心肌细胞线粒体排列规则,部分线粒体轻度肿胀,嵴完整,肌丝结构清晰,Z线清晰,血管内皮细胞无肿胀,管腔外未见中性粒细胞浸润。 3作用机制部分: ⑴同缺血再灌注模型组比较,大蒜素长循环脂质体组心肌MPO、MDA水平降低了17.20%(P<0.01)和50.48%(P<0.05);血浆CK、MDA水平降低了26.07%和37.24%(P<0.01)。 ⑵同缺血再灌注模型组比较,大蒜素长循环脂质体组心肌氧饱和度在缺血期不随缺血时间延长而降低。 结论: 1成功制备出大蒜素长循环脂质体和大蒜素脂质体两种制剂,它们对血管和粘膜的刺激性较注射液减轻;大蒜素长循环脂质体能显著提高药物在缺血再灌注大鼠体内的血浆浓度,延长药物在血循环中的时间。 2大蒜素长循环脂质体能缩小缺血再灌注心肌梗死范围,减少心肌细胞死亡,使缺血心肌的超微结构得到改善。 3大蒜素长循环脂质体保护缺血心肌的机制与抑制心肌炎症反应、减轻脂质过氧化损伤、保护内皮细胞、改善心肌微循环有关。
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