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当归、红芪及其合剂超滤膜提取物促缺血心肌血管新生的实验研究
中文名称: 当归、红芪及其合剂超滤膜提取物促缺血心肌血管新生的实验研究
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论文编号: 3121618收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: An Experimental Study on Angiogenesis Promoting Effect of the Ultra-filtration Extract from Angelica Sinensis, Hedysarum Polybotrys and Their Mixture in Ischemic Myocardium
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 中西医结合临床
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 当归 红芪 血管新生 心肌缺血 超滤膜 心血管疾病 合剂
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论文简介:当归、黄芪是中医补血、益气的常用药物,两药按1:5配伍组成著名的当归补血汤,为中医补血生脉的基本方。红芪作为黄芪的代用品,在临床广泛应用。现代药理学研究发现当归、红芪具有一定的抗心肌缺血的作用,但由于其化学成分复杂,目前尚难以确定其药效成份。本论文应用超滤膜分离技术精制当归、红芪及其合剂水提液,应用大鼠心肌梗死模型、血流动力学监测、血管内皮细胞培养、鸡胚尿囊绒毛膜实验及分子生物学技术,对当归、红芪及其合剂50000分子量以下水提物促血管新生的作用进行了研究,主要研究内容有以下几个方面: 1.应用陶瓷膜微滤和聚丙烯腈(PNA)中空纤维超滤膜(截留分子量为5万子量)精制当归、红芪及其合剂水提物。 2.建立大鼠急性心肌梗塞实验模型。Wistar大鼠用1%戊巴比妥钠麻醉后,切开颈部皮肤暴露气管,经口气管插管,人工呼吸,经左胸第3、4肋间纯性分离开胸,结扎左冠状动脉前降支。本法手术成功率72.6%,术后72小时内大鼠死亡率仅为3.2%;本技术操作简单,创伤轻、成功率高、结果可靠。 3.为探讨当归、红芪超滤膜提取物对鸡胚尿囊绒毛膜新生血管生成的影响,制备CAM模型,观察应用当归、红芪及其合剂(1:5)超滤膜提取物后CAM血管生成情况。结果表明当归和当归红芪合剂超滤膜提取物均有明显的促血管新生作用,而红芪未显示有促血管生成作用。提示当归超滤膜提取物具有促进CAM血管生成的作用,而当归与红芪配伍后促进CAM新生血管生成的作用更好。 4.为探讨当归、红芪及其合剂超滤膜提取物是否对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)具有促增殖作用,并进一步研究血管内皮生长因子(VEGF)基因在此过程中的作用,以离体培养的ECV-304细胞为摸型,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增值,流式细胞仪分析细胞周期,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR))法检测VEGFmRNA表达的变化;观察了当归、红芪及其超滤膜提取物对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)增殖作用的影响。结果表明当归及当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞有促增殖作用,并具有下调细胞周期中G<,0>/G<,1>期细胞数目,上调s期细胞数目的作用,尤以当归红芪合剂超滤膜提取物作用明显。单用红芪超滤膜提取物无此作用;在ECV-304细胞增殖过程中,当归及当归红芪合剂超滤膜提取物能够诱导VEGFmRNA的表达,并呈一定的量效正相关。 5.用结扎冠状动脉制备大鼠心肌梗塞模型,采用拉丁方实验设计,32只雄性wistar大鼠随机分成3d、7d、14d、21d组后,观察大鼠心肌梗塞和服药后MAP、心肌酶和血清NO的变化。结果表明大鼠急性心肌梗塞14d后MAP逐渐升高,LDH、cK-MB和AST在7-14d降低;心梗后24h,大鼠血清NO水平增高,3d后下降;各服药组大鼠MAP、LDH、cK-MB和NO有差异,但无统计学意义(P>0.05),提示心梗和用药时间对大鼠MAP、心肌酶和NO有明显影响,而中药对心肌的保护作用可能与用药时间长短有关。 6.为了观察当归、红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠心肌毛细血管密度和病理形态的影响,探讨其保护缺血心肌的机制。建立大鼠急性心肌梗塞模型,采用拉丁方实验设计,将32只雄性wistar大鼠随机分成3d、7d、14d、21d组,每日灌胃当归、红芪及其合剂超滤膜提取物2次,制模后3d、7d、14d、21d分别取材,用碱性磷酸酶组织化学法染色,系统分析缺血心肌内皮细胞数和毛细血管密度。结果表明当归红芪合剂(<5000分子量)组大鼠缺血心肌内皮细胞数和毛细血管密度明显高于其它药物组,心梗7-14d组大鼠心肌内皮细胞数和毛细血管密度明显增高(P<0.05)。提示急性心肌梗塞后1周,缺血心肌血管新生增加,而当归红芪合剂超滤膜提取物(<5000分子量)对大鼠急性缺血心肌血管新生有一定的促进作用,其作用随用药时间而增强。 7.系统综述了当归、红芪及其血管新生的进展;重点讨论了当归、红芪在防治心血管疾病中的应用;讨论了超滤膜技术在中药提取分离中的应用;论述了血管新生的意义、研究方向。
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