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实验性间断低氧状态下大鼠神经系统损伤及其机制的研究
中文名称: 实验性间断低氧状态下大鼠神经系统损伤及其机制的研究
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论文编号: 3121583收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Neuronal Injury in Experimental Intermittent Hypoxia Rats
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 内科学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 间断低氧 诱导型一氧化氮合成酶 缺氧诱导因子-1α 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 电泳迁移率分析 缺氧应答反应 认知功能障碍
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文简介:模拟中度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者的低氧状态,观察间断低氧(IH)对大鼠神经细胞凋亡的影响,探讨OSAHS患者出现认知功能障碍的病理生理机制;观察IH状态下大鼠脑内诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)的表达,探讨二者在神经细胞凋亡中的作用,并结合HIF-1转录活性的测定,研究以HIF-1为核心的神经系统缺氧应答反应的分子机制;通过对比不同方式低氧状态下HIF-1a的表达情况,对间断低氧这种OSAHS所特有的低氧方式在睡眠呼吸暂停中所起的作用进行初步的评价。 材料与方法 1 材料 成熟雄性Wistar大鼠24只,体重300-350克,混合气体(10%氧气),气体交换控制系统;氧浓度监测仪;iNOS和HIF-1a的抗体,蛋白提取试剂盒;Trizol溶液;紫外可见分光光度计;PCR循环仪;一步法PCR试剂盒;γ-P<'32>标记的dATP等。 2实验步骤 成熟雄性Wistar大鼠24只,体重300-350克,由中国医科大学实验动物中心提供。随机数字法分为3组:慢性低氧组(n=8),在预留有进出气孔的封闭箱体内,持续吹入10%O<,2>的气体;间断低氧组(n=8),在预留有进出气孔的封闭箱体内,由进气孔交替(90s交替)吹入氮气和空气,出气孔接气体检测仪,分析箱内O<,2>和CO<,2>的浓度,通过调节氮气的流量,使箱内气体在lO%O<,2>和空气之间交替循环;常氧对照组(n=8),在预留有进出气孔 的封闭箱体内,持续吹人空气。实验每天早晨8:00开始,每日8小时(基本为大鼠的睡眠时间)。进食采用日常随意饮食,30天后处死。 3测定方法: ⒈细胞凋亡的检测:末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记(TUNEL)法,购自Roche公司。 ⒉HIF-1α和iNOS蛋白水平的检测:免疫组化(定位)及免疫印迹Western Blot(半定量),抗体购自Santa Cruz及NEOMARKER公司。 ⒊HIF-1α和iNOS mRNA的检测:采用一步法R1-PCR,试剂购自Takara公司。 ⒋HIF-1αDNA结合活性的检测:电泳迁移率分析(EMSA)。 4统计学处理: 结果应用SPSS11.0软件进行统计分析,相关的显著性检验采用单因素方差分析,P
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