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柔嫩艾美耳球虫cDNA文库的构建及其主要抗原基因的克隆与表达
中文名称: 柔嫩艾美耳球虫cDNA文库的构建及其主要抗原基因的克隆与表达
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论文编号: 3116570收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: The Construction of cDNA Expression Library of Eimeria Tenella and Screening, Cloning & Expression of Major Immunogen Gene
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床兽医学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 柔嫩艾美耳球虫 cDNA表达文库 免疫筛选 基因克隆 融合表达
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 顶复门都是由原生动物组成的寄生虫,它包含了一些重要的兽医寄生虫和医学寄生虫(如艾美耳球(略)巴贝斯虫、弓形虫、隐孢子虫、住肉孢子虫).在各种寄生虫感染中,寄生在细胞内的艾美耳属球虫是主要制约现代家禽生产的一种原虫病.艾(略)仅威胁家禽的健康和生命安全,而且在全球范围内可导致严重的经济损失.在各种艾美耳球虫中,寄生在盲肠中的柔嫩艾美耳球虫致病性最强.尽管采用了一些免疫学、生物(略)学的方法,但目前控制球虫病仍然主要依靠抗球虫的化学药物来预防.然而,由于许多抗球虫药出现了严重的抗药性而使用受限.加之药物或抗生素在家禽产品中的残留问题越来越受到消费者的关注,迫使人们寻求防治的新途径.在众多控制球虫的方法中,免疫学防治前景诱(略)取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子构建其cDNA表达文库,从中筛选、克隆免疫原基因,并进行表达、功能分析和动物免疫保护试验,获得了以下结果. 1.用纯化的E. tenella杨凌株(YL)孢子化卵囊(略)雏鸡,制备鸡抗E. tenella YL株阳性血清;用纯化的E. tenella YL株孢子化卵囊作为抗原,裂解后加佐剂...
The Phylum Apicomplexa is(omitted)entirely of parasitic protists, including many pathogens of veterinary a(omitted) importance (e.g., Eimeria, Plasmodium, Babesia, Toxoplasma, Cryptosporidium and Sarcocystis). Among various parasitic infections, coccidiosis caused by obligate intra(omitted)rotozoan parasite of the genus Eimeria is the major constraint for modern poultry producti(omitted)iosis, caused by various Eimeria spp., not(omitted)atens the health and welfare of poultries, but also causes si...
目录:
摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
第1章 球虫病研究概况第12-25页
  ·球虫病研究简史第12-14页
  ·球虫的分类学第14-15页
  ·球虫卵囊形态特征第15-17页
    ·卵囊外形第16页
    ·卵囊大小第16页
    ·卵囊色泽第16页
    ·卵囊外膜第16页
    ·卵膜孔(微孔)第16-17页
    ·卵囊残体第17页
    ·孢子囊第17页
    ·极粒第17页
    ·孢子囊残体第17页
    ·子孢子第17页
  ·球虫生活史第17-25页
    ·孢子生殖(Sporogony)第17-18页
    ·裂殖生殖(shizogony)第18-22页
    ·配子生殖(gametogony)第22-25页
第2章 球虫体外培养的研究进展第25-39页
  ·球虫的细胞培养第25-36页
    ·培养基第26-27页
    ·卵囊的制备第27页
    ·鸡肾细胞的制备第27-28页
    ·子孢子的制备、纯化及接种第28-29页
    ·各种艾美耳球虫在细胞培养基上的发育第29-33页
    ·细胞培养基上艾美耳球虫的发育过程第33-36页
  ·球虫在鸡胚中的培养第36-38页
    ·球虫在鸡胚中的发育及病理反应第36-37页
    ·影响球虫在鸡胚中发育的因素第37-38页
  ·结语第38-39页
第3章 艾美耳球虫功能基因组的研究进展第39-55页
  ·功能基因组学的概念第39-40页
  ·功能基因组学研究的主要内容、意义及其方法第40-44页
    ·功能基因组学研究的主要内容第40页
    ·功能基因组学研究的意义第40页
    ·功能基因组学的研究方法第40-44页
  ·艾美耳球虫基因组第44-55页
    ·分子核型第44-45页
    ·基因组研究第45-47页
    ·鸡球虫基因的研究进展第47-55页
第4章 鸡球虫免疫及疫苗的研究进展第55-66页
  ·鸡球虫的免疫原性第55-56页
    ·免疫原性第55-56页
    ·抗原分子及抗原基因的分析与鉴定第56页
  ·宿主的免疫应答作用与保护性免疫作用机制第56-58页
    ·免疫应答作用第56-58页
    ·宿主保护性免疫作用机制第58页
  ·交叉免疫问题第58-59页
  ·球虫疫苗的研究概况第59-66页
    ·强毒苗第59-60页
    ·弱毒苗第60-61页
    ·亚单位疫苗第61-62页
    ·重组疫苗第62-63页
    ·核酸疫苗第63-65页
    ·展望第65-66页
第5章 柔嫩艾美耳球虫卵囊的收集及阳性血清的制备第66-71页
  ·材料与方法第66-68页
    ·材料第66页
    ·方法第66-67页
    ·免疫血清的检测第67-68页
  ·结果与分析第68-70页
    ·单一种E.tenella YL 株卵囊收集的结果第68-69页
    ·鸡抗E.tenella YL 株阳性血清ELISA 检测结果第69页
    ·兔抗鸡E.tenella YL 株阳性血清ELISA 检测结果第69-70页
  ·讨论第70-71页
第6章 柔嫩艾美耳球虫CDNA 表达文库的构建第71-90页
  ·材料与方法第71-82页
    ·材料第71-72页
    ·方法第72-82页
  ·结果第82-85页
    ·总RNA 提取和mRNA 分离第82页
    ·双链cDNA 检测结果第82-83页
    ·大片段cDNA 的选择第83页
    ·cDNA 文库基础库容量第83页
    ·扩增文库库容量第83-84页
    ·cDNA 表达文库插入片段长度分析第84-85页
  ·讨论第85-90页
    ·孢子化卵囊和子孢子的质量问题第85-86页
    ·总RNA 和mRNA 的质量问题第86页
    ·m RNA 分离及引物的选择第86-87页
    ·cDNA 表达文库的质量问题第87-90页
第7章 柔嫩艾美耳球虫YL 株3-1E 基因的克隆、表达与蛋白结构预测第90-106页
  ·材料与方法第90-98页
    ·材料第90-91页
    ·方法第91-98页
  ·结果与分析第98-105页
    ·E. tenella YL 3-1E 基因的克隆第98-99页
    ·E. tenella YL 3-1E 基因序列测定及序列分析第99-102页
    ·-1E 蛋白结构预测第102-104页
    ·重组表达质粒pGEX-3-1E 的构建及鉴定第104页
    ·重组表达质粒pGEX-3-1E 的构建及鉴定第104页
    ·-1E 基因表达产物SDS-PAGE 分析第104-105页
  ·讨论第105-106页
第8章 柔嫩艾美耳球虫CDNA 表达文库的免疫学筛选与克隆第106-119页
  ·材料与方法第106-111页
    ·材料第106-107页
    ·方法第107-111页
  ·结果第111-116页
    ·阳性克隆的筛选结果第111-112页
    ·阳性噬斑PCR 扩增结果第112页
    ·阳性克隆的重组质粒鉴定结果第112-113页
    ·目的片段的序列测定及分析结果第113-116页
  ·讨论第116-119页
第9章 MIC-2 基因的表达与功能分析第119-128页
  ·材料与方法第119-121页
    ·材料第119页
    ·方法第119-121页
  ·结果与分析第121-126页
    ·重组表达质粒pGEX-MIC-2 的构建及鉴定第121-122页
    ·MIC-2 基因表达产物SDS-PAGE 分析第122页
    ·MIC-2 基因及其编码蛋白的结构预测第122-126页
  ·讨论第126-128页
    ·外源蛋白质融合表达策略第126页
    ·外源蛋白质表达部位选择策略第126-127页
    ·生物信息学技术分析预测编码蛋白的结构与功能策略第127页
    ·MIC-2 外源蛋白融合表达的特点第127-128页
第10章 重组表达抗原对鸡球虫感染的免疫保护效果研究第128-139页
  ·材料与方法第128-133页
    ·材料第128-129页
    ·方法第129-133页
  ·结果与分析第133-137页
    ·可溶性蛋白的Western-blotting 分析结果第133页
    ·蛋白含量第133-134页
    ·增重变化第134-135页
    ·克盲肠内容物卵囊数第135-136页
    ·盲肠病变记分情况第136-137页
    ·抗球虫指数(ACI)第137页
  ·讨论第137-139页
结论第139-140页
参考文献第140-152页
附录第152-158页
缩略语英汉对照表第158-159页
致谢第159-160页
作者简介第160-161页
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