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条锈菌诱导的小麦抑制差减杂交文库构建(SSH)及其表达序列标签(ESTs)研究
中文名称: 条锈菌诱导的小麦抑制差减杂交文库构建(SSH)及其表达序列标签(ESTs)研究
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论文编号: 3116561收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Construction and EST Analysis of a SSH cDNA Library of Wheat Leaves Induced by Puccinia Striifomis
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 生物化学与分子生物学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 小麦条锈病 抑制差减杂交 表达序列标签 荧光定量PCR RACE
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 由Puccinia striiformis f. sp. Tritici引起的小麦条锈病是我国小麦生产上最重要的病害之一,它分布广、传播快(略)育并合理利用抗病品种是防治麦类锈病最为经济而有效的措(略),由于条锈菌毒性变异频繁,新的毒性小种不断出现,往往导致小麦品种抗锈性丧失,这已成为抗病品种应用中一个突出的问题.开展小麦与条锈菌互作的分子机理研究,不但可以揭示病原物的致病机理和寄主植物的抗病机制,而且对小(略)的合理利用及病害的可持续控制具有重要的理论和实际意义.本研究利用抑制差减杂交技术构建了条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库,对文库中序列进行了功能注释和分类,初步探明了条锈菌诱导后小麦的基因表达情况,并对筛选到的抗病相关基因(略)为从分子水平阐明小麦的抗病机制奠定了基础.本论文主要包括以下几方面内容: 1.采用4种方法对小麦不同器官的总RNA进行了提取.比较后发现Na(略)醇沉淀法适于小麦各器官总RNA的提取,具有沉淀时间短、产量高、操作简便、价格便宜等优点;不同器官的总RNA以小麦乳熟期籽粒中含量最高;研究表明小麦叶片的rRNA组成比较复杂,除含有细胞质2...
Wheat stripe rust, caused by Puccinia striiformis f. sp. Tritici, was one of the mo(omitted)nt w(omitted)ses in China, and with the characteristics of wide distribution, fast prevalence and severe(omitted)t has been demonstrated that the reasonable use of resistant wheat cultivars is the mos(omitted)e and economical method to control wheat rust diseases. However, new higher virulent race of P. stri(omitted)ten made the original resistant cultivars disability, which had become a prominent question ...
目录:
摘要第5-7页
Abstract第7-9页
第1章 文献综述第13-51页
  ·小麦条锈病的危害及研究现状第13-17页
    ·小麦条锈病的危害第13页
    ·小麦条锈病的研究现状第13-17页
  ·植物抗病的分子机制第17-25页
    ·植物抗病基因研究进展第17-20页
    ·植物过敏性反应研究进展第20-23页
    ·植物系统获得抗病性(SAR)研究进展第23-24页
    ·植物抗病基因介导的信号途径第24-25页
  ·差减杂交技术、表达序列标签技术及其应用第25-35页
    ·差减杂交技术第25-31页
    ·表达序列标签(ESTs)技术第31-35页
  ·生物信息学与ESTS 研究第35-42页
    ·生物信息学的产生和定义第35-36页
    ·生物信息学的国内外研究现状第36-37页
    ·生物信息学数据库的特点第37页
    ·生物信息学在ESTs 研究中的应用第37-42页
  ·实时荧光定量PCR 技术第42-49页
    ·PCR 技术从定性到定量的飞跃第42页
    ·实时荧光定量PCR 技术原理第42-43页
    ·荧光化学第43-46页
    ·定量方法第46-48页
    ·荧光定量PCR 技术在植物上的应用第48-49页
  ·本研究的目的及意义第49-50页
  ·技术路线第50-51页
第2章 小麦不同器官总RNA 含量及不同提取方法的比较第51-58页
  ·材料与方法第51-54页
    ·生化试剂第51-52页
    ·试验仪器第52页
    ·植物材料第52页
    ·小麦叶片总RNA 提取第52-53页
    ·总RNA 中基因组DNA 的去除第53-54页
    ·小麦叶片总RNA 的浓度及纯度检测第54页
    ·小麦叶片总RNA 的完整性检测第54页
  ·结果与分析第54-56页
    ·小麦叶片总RNA 浓度及纯度检测第54-55页
    ·不同器官总RNA 完整性检测第55-56页
  ·结论与讨论第56-58页
第3章 条锈菌诱导的小麦SSH 文库构建及ESTS 大规模生物信息学分析第58-85页
  ·材料与方法第58-68页
    ·主要仪器与试剂第58-59页
    ·供试菌种和小麦品种第59页
    ·接种和培养第59页
    ·取样量及取样时间第59页
    ·总RNA 提取与mRNA 分离纯化第59-60页
    ·抑制差减杂交第60-65页
    ·PCR 产物的纯化第65页
    ·PCR 产物的载体连接反应第65页
    ·感受态细胞的制备及连接产物的转化第65-66页
    ·文库重组率检测第66页
    ·文库片段大小检测第66页
    ·大规模质粒提取第66-67页
    ·序列测定第67页
    ·序列分析第67-68页
  ·结果与分析第68-79页
    ·总RNA 提取结果第68页
    ·RNA 浓度及纯度测定第68页
    ·mRNA 质量检测结果第68页
    ·抑制差减杂交检测结果第68-70页
    ·SSH cDNA 文库质量评价及测序结果第70-72页
    ·ESTs 获得与分析第72-79页
  ·结论与讨论第79-85页
    ·高质量RNA 是构建高质量文库的基础第79页
    ·SSH 文库的质量检测第79-80页
    ·SSH 技术的优缺点第80-81页
    ·小麦接种条锈菌初期参与抗病过程的相关基因第81-85页
第4章 小麦抗病相关基因的表达分析第85-97页
  ·材料与方法第85-90页
    ·小麦材料第85页
    ·生化试剂及仪器第85页
    ·菌株第85-86页
    ·小麦叶片总RNA 的提取第86页
    ·四条抗病相关ESTs 的反转录PCR 表达情况分析第86-87页
    ·三条抗病相关基因的荧光定量检测第87-90页
  ·结果与分析第90-95页
    ·反转录PCR 验证抗病相关基因的表达情况第90-91页
    ·荧光定量PCR 检测抗病相关基因的表达模式第91-95页
  ·结论与讨论第95-97页
第5章 两条小麦抗病相关基因的克隆及其生物信息学分析第97-119页
  ·材料与方法第97-101页
    ·两个小麦抗病相关基因的电子克隆及分析第97-98页
    ·两个抗病相关基因的RACE 全长克隆及分析第98-101页
  ·结果与分析第101-116页
    ·抗病性相关基因的电子克隆第101-105页
    ·RACE 全长基因及其生物信息学分析第105-116页
  ·结论与讨论第116-119页
    ·电子克隆技术应用于小麦基因克隆的可行性及其优缺点第116页
    ·RACE 技术的优缺点第116-117页
    ·过敏性反应诱导蛋白第117-118页
    ·神经鞘氨醇酶第118-119页
结论第119-120页
参考文献第120-133页
附录第133-143页
致谢第143-144页
作者简介第144页
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