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猪水疱病和猪瘟基因工程亚单位疫苗的研究
中文名称: 猪水疱病和猪瘟基因工程亚单位疫苗的研究
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论文编号: 3116558收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Study on Genetically Engineered Subunit Vaccines Against Swine Vesicular Disease and Classical Swine Fever
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床兽医学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 猪水疱病病毒P1基因 猪瘟病毒E2基因 逆转录病毒 亚单位疫苗 豚鼠 家兔
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 猪水疱病和猪瘟均被世界动物卫生组织(OIE)列入A类动物疫病.猪水疱病是一种急性传染病,该病的临床症状与口蹄疫及其它水疱性疾病相似,难以(略)碍了猪及猪产品的流通和国际贸易;猪瘟是一种急性烈性传染病,致(略)严重.猪瘟弱毒疫苗对于控制猪瘟大流行虽然起到重要的作用,但使用弱毒疫苗后,难以区分疫苗免疫和野毒感染动物,不利于鉴别病猪.目前,国际上还没有预防猪水疱病的疫苗.研制安全高效并具有潜在(略)程疫苗,将为控制猪水疱病和猪瘟探索新的技术方法. 本研究通过一系列分子生物学技术制备了猪水疱病和猪瘟基因工程亚单位疫苗,研究其免疫效果,为猪水疱病和猪瘟新型疫苗的研究探索一条可供参考之路. 1.构建了猪水疱病结构蛋白P1区重组逆转录病毒载体(pBABE puro-P1),并与水疱性(略)pVSV-G共转染GP2-293包装细胞,获得了包装完整的假病毒,测定滴度.假病毒经polybrene(8μg/mL(略)假病毒感染靶细胞PK-15,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆.间接免疫荧光显示PK-15细胞表达的P1衣壳前体蛋白能被猪水疱病病毒(SVDV)阳性血清所识别,表明所表达的...
Both the Swine vesicular disease (SVD) and Classical swine fe(omitted)are two list A diseases defined by Office International(omitted)oties (OIE) due to their high infectivities to pigs and damages to pig-feeding industry. SVD is an(omitted)ly contagious disease of pigs, which its cilinical symptom is similar to the one causes by Foot and mouth disease (FMD) so that it has been c(omitted) as economically important during pig pr(omitted)rency and international trade. CSF is an acute or chronic dise...
目录:
摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
文献综述第14-45页
  第1章 猪水疱病及猪水疱病病毒研究进展第14-23页
    ·猪水疱病研究进展第14-17页
      ·病原学第14页
      ·猪水疱病的流行病学第14-15页
      ·猪水疱病的临床症状和发病机理第15-16页
      ·诊断第16页
      ·猪水疱病的防控策略第16-17页
    ·猪水疱病病毒研究进展第17-20页
      ·猪水疱病病毒的形态及理化特性第17页
      ·SVDV 基因组结构第17-18页
      ·SVDV 编码的蛋白及其功能第18-20页
        ·结构蛋白第18-19页
        ·非结构蛋白第19-20页
    ·猪水疱病疫苗研究进展第20-21页
      ·弱毒疫苗第20页
      ·抗独特型抗体疫苗第20-21页
      ·基因工程疫苗第21页
        ·基因缺失毒力致弱疫苗第21页
        ·亚单位疫苗第21页
        ·基因工程活载体疫苗第21页
      ·合成肽疫苗第21页
    ·小结第21-23页
  第2章 猪瘟及猪瘟病毒研究进展第23-36页
    ·概述第23-24页
    ·CSFV 的病原学及生物学特性第24-26页
      ·CSFV 的病原学第24-25页
        ·CSFV 病毒粒子结构第24-25页
        ·CSFV 的理化特性第25页
      ·CSFV 生物学特性研究进展第25-26页
        ·抗原性第25页
        ·病原性及病理特性第25-26页
        ·遗传特性第26页
    ·CSFV 致病机制的研究第26-30页
      ·CSFV 的免疫病理学第26-27页
      ·CSFV 在体内的复制过程第27-29页
      ·猪瘟病毒对体外培养细胞的影响第29-30页
    ·CSFV 的分子免疫学第30-32页
    ·猪瘟防制策略与防制新技术的研究进展第32-35页
    ·结束语第35-36页
  第3章 逆转录病毒载体系统的研究第36-45页
    ·逆转录病毒表达系统第36-39页
      ·逆转录病毒表达载体第36-38页
        ·辅助病毒互补的逆转录病毒质粒载体第36-37页
        ·不需要辅助病毒互补的逆转录病毒载体第37页
        ·广寄主的逆转录病毒载体第37页
        ·逆转录病毒表达载体第37-38页
      ·包装细胞系第38页
      ·水疱性口炎病毒载体第38-39页
    ·逆转录病毒表达系统基本原理第39-40页
    ·逆转录病毒载体的构建与应用第40页
    ·影响逆转录病毒载体表达效率的影响因素第40-41页
    ·逆转录病毒表达系统在基因治疗及表达研究中的应用第41-43页
      ·逆转录病毒载体系统在基因治疗中的应用第41-42页
      ·逆转录病毒载体在基因表达反面的应用第42-43页
    ·逆转录病毒载体系统的缺陷第43-44页
    ·小结第44-45页
试验研究第45-80页
  第4章 猪水疱病亚单位标记疫苗的构建及体外表达第45-55页
    ·材料与方法第45-51页
      ·质粒载体、工程菌及主要试剂第45页
      ·主要仪器第45-46页
      ·细胞及种毒第46页
      ·引物的设计与合成第46页
      ·目的基因的获取第46-47页
      ·重组质粒的构建、克隆及鉴定第47-49页
        ·构建策略第47页
        ·重组质粒的构建即克隆方法第47-49页
          ·大肠杆菌JM109 感受态的制备第47-48页
          ·PCR 产物及载体质粒的酶切、回收及连接第48页
          ·连接产物的转化第48页
          ·重组质粒的制备第48-49页
          ·重组质粒的鉴定第49页
        ·重组SCDV HK/70 P1 基因的逆转录病毒载体的构建第49页
        ·重组质粒的测序第49页
      ·体外转染质粒的制备第49-50页
      ·转染包装细胞GP2-293第50页
      ·重组假型病毒的收获第50页
      ·病毒滴度的检测第50页
      ·假型重组逆转录病毒感染PK15 细胞第50页
      ·P1 基因体外表达的检测第50-51页
        ·P1 基因的PCR 整合鉴定第50-51页
        ·间接免疫荧光检测P1 基因的表达第51页
        ·P1 基因在PK15 细胞中的稳定性鉴定第51页
    ·结果第51-53页
      ·SVDV HK/70 P1 基因的PCR 扩增结果第51-52页
      ·重组质粒pBABE puro-P1 的鉴定结果第52页
      ·假型病毒感染PK15 细胞后PCR 鉴定P1 基因的整合结果第52页
      ·免疫荧光检测PK15 细胞中P1 基因的表达第52-53页
      ·P1 基因的稳定性整合鉴定结果第53页
    ·讨论第53-55页
  第5章 猪水疱病亚单位疫苗的豚鼠免疫实验第55-62页
    ·材料与方法第55-58页
      ·免疫原与实验动物第55页
      ·主要试剂第55页
      ·免疫用抗原的制备第55页
      ·重组抗原对豚鼠的免疫程序第55页
      ·T 淋巴细胞增殖实验第55-57页
        ·各种溶液的配制第56页
        ·淋巴细胞的分离方法第56页
        ·淋巴细胞的增殖实验第56-57页
      ·双夹心ELISA 检测免疫豚鼠的SVDV 特异性抗体第57页
      ·SVDV HK/70 的复壮及半数细胞感染剂量(TCID50)的测定第57页
      ·细胞中和实验测定豚鼠血清SVDV 抗体效价第57-58页
    ·结果第58-60页
      ·T 淋巴细胞增殖实验第58页
      ·免疫豚鼠SVDV 特异性抗体的动态变化第58-59页
      ·SVDV 半数感染剂量的测定结果第59-60页
      ·细胞中和实验测定豚鼠中和抗体第60页
    ·讨论第60-62页
  第6章 猪瘟亚单位疫苗的构建及体外表达第62-73页
    ·材料与方法第62-68页
      ·质粒载体、工程菌及主要试剂第62-63页
      ·主要仪器第63页
      ·细胞第63页
      ·引物的设计与合成第63页
      ·目的基因的获取第63-64页
      ·重组质粒的构建、克隆及鉴定第64-66页
        ·构建策略第64-65页
        ·重组质粒的构建及克隆的基本方法第65-66页
          ·大肠杆菌JM109 感受态的制备第65页
          ·PCR 产物及载体质粒的酶切、回收及连接第65页
          ·连接产物的转化第65页
          ·重组质粒的制备第65-66页
          ·重组质粒的鉴定第66页
        ·重组CSFV Shimen E2 基因的逆转录病毒载体的构建第66页
        ·重组质粒的测序第66页
      ·体外转染质粒的制备第66-67页
      ·转染包装细胞GP2-293第67页
      ·重组假型病毒的收获第67页
      ·病毒滴度的检测第67页
      ·假型重组逆转录病毒感染PK15 细胞第67-68页
      ·E2 基因体外表达的检测第68页
        ·E2 基因的PCR 整合鉴定第68页
        ·间接免疫荧光检测E2 基因的表达第68页
        ·夹心 ELISA 检测 E2 蛋白的活性第68页
        ·E2 基因在PK15 细胞中的稳定性整合鉴定第68页
    ·结果第68-70页
      ·CSFV Shimen E2 基因的PCR 扩增结果第68页
      ·重组质粒pBABE puro-E2 的鉴定结果第68-69页
      ·假型病毒感染PK15 细胞后PCR 鉴定E2 基因的整合结果第69页
      ·E2 基因的稳定性整合鉴定结果第69-70页
      ·免疫荧光检测PK15 细胞中E2 基因的表达第70页
      ·ELISA 检测细胞培养物中E2 蛋白的生物学活性第70页
    ·讨论第70-73页
  第7章 猪瘟亚单位疫苗的兔免疫保护实验第73-80页
    ·材料与方法第73-75页
      ·主要试剂第73页
      ·免疫用的抗原的制备第73页
      ·重组抗原对家兔的免疫实验第73-74页
      ·T 淋巴细胞增殖实验第74页
        ·各种溶液的配制第74页
        ·淋巴细胞的分离方法第74页
        ·T 淋巴细胞增殖实验第74页
      ·阻断ELISA 检测免疫家兔的CSFV 特异性抗体第74-75页
      ·实验兔子的病毒攻击保护实验第75页
    ·结果第75-78页
      ·T 淋巴细胞增殖情况第75页
      ·免疫兔子CSFV 特异性抗体的动态变化第75-77页
      ·攻毒兔子的免疫保护实验结果第77-78页
        ·兔子体温变化第77页
        ·攻毒兔子脾脏变化第77-78页
    ·讨论第78-80页
结论第80-81页
参考文献第81-95页
附录第95-101页
致谢第101-102页
作者简介第102页
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