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诺如病毒核酸荧光定量检测及其衣壳蛋白基因重组腺病毒免疫效果的研究
中文名称: 诺如病毒核酸荧光定量检测及其衣壳蛋白基因重组腺病毒免疫效果的研究
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论文编号: 3116557收藏本论文】【我的收藏】【我要投稿
英文名称: Real-time PCR Detecting for Norovirus and Immune Effects of Its Capsid Recombinant Adenovirus
学位类型: 博士毕业论文
作者: 涉及隐私,隐去***  作者本人请参看权力声明>>
导师: 涉及隐私,隐去***
毕业学校: 涉及隐私,隐去***
专业: 临床兽医学
毕业年份: 涉及隐私,隐去***
关键字: 人类杯状病毒 诺如病毒 基因型 Real-time RT-PCR 重组腺病毒 免疫效果
简介目录: 点击此处 免费索取本论文简介和目录>>
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论文摘要: 杯状病毒(Calicivirus)是一种人畜共患的病原体,是世界范围内人类急性病毒性胃肠炎的主要病原之一,对公共卫生有着重要影响.杯状病毒目前已知能(略)诺如病毒(Norovirus)和札如病毒(Saporov(略)个属,常在医院、餐馆、学校、托儿所、养老院、军队、家庭及其他人群中引起暴发性非菌性腹泻.根据RNA聚合酶区或外壳蛋白区的核苷酸和氨基酸序列,可将诺如病毒和札如病毒分为不同的基因组,目前已知诺如病毒基因组Ⅰ(GGⅠ)和Ⅱ(GGⅡ),札如病毒基因组SGⅠ和SGⅡ均可感染人.尽管杯状病毒引起的急性胃肠炎(略)腹泻和腹部痉挛等)呈自限性,但若治疗不及时仍会导致死亡,因此检测该病毒的感染情况对于疾病控制和临床诊断均具有重要意义. 近年来我国杯状病毒性腹泻发生率呈上升趋势,已在多个地区发生暴发流行.但是由于杯(略)多,变异频繁,其流行具有一定的地域和时间(略)调查我国不同地区的杯状病毒流行特征、建立可靠的检测技术并开展其疫苗研究,对于全面掌握我国杯状病毒病的流行状况,评估其造成的经济社会负担及制订相应的控制策略具有重要意义.有鉴于此,本实验研究了山东济南地区存在...
Calicivirus are one of zoonosis p(omitted)d the most common causes of gastroenteritis in all age groups and large outbreaks remain an important public health (omitted)rldwide. Norovirus and saporovirus were comprised to human calicivirus, due to the non- bacterium diarrhea outbreak (omitted)l, restaurant, school, nursery, gerocomium, armed forces, family (omitted)crowd. Different genogroup were divided according to nucleotide (omitted)acid sequence of RNA polymerase and capsid, GGⅠand GGⅡof norovi...
目录:
摘要第4-7页
ABSTRACT第7-10页
第1章 杯状病毒研究进展第14-37页
  ·杯状病毒概述第14-19页
    ·杯状病毒的种类第14-16页
    ·人杯状病毒第16-19页
  ·杯状病毒的检测分析方法第19-23页
    ·电镜法第19-20页
    ·免疫学检测技术第20-21页
    ·分子生物学检测第21-23页
  ·杯状病毒疫苗的研究进展第23-25页
  ·荧光定量 PCR 技术及其在兽医学中的应用第25-35页
    ·荧光定量PCR 技术的原理第26-27页
    ·荧光定量PCR 技术的种类第27-31页
    ·荧光定量PCR 技术在兽医学中的应用第31-35页
  ·论文的研究目的和研究方法第35-37页
第2章 济南地区婴幼儿杯状病毒腹泻病的流行特征第37-57页
  ·材料第37-38页
    ·菌种第37页
    ·试剂第37页
    ·仪器和器材第37页
    ·引物第37-38页
    ·临床标本第38页
  ·方法第38-41页
    ·标本处理第38页
    ·轮状病毒的ELISA 检测第38页
    ·病毒核酸(RNA)的提取第38-39页
    ·逆转录(RT)反应第39页
    ·杯状病毒cDNA 的PCR 检测第39页
    ·PCR 产物的克隆第39-41页
    ·DNA 重组体的筛选与鉴定第41页
    ·DNA 序列分析第41页
    ·序列比对与分析第41页
  ·结果第41-55页
    ·腹泻粪便标本中杯状病毒的检测第41-42页
    ·PCR 产物的克隆和cDNA 序列分析结果第42-46页
    ·杯状病毒基因序列的亲缘性关系分析第46页
    ·核苷酸序列的同源性分析第46-55页
  ·讨论第55-56页
  ·小结第56-57页
第3章 GGⅡ型诺如病毒Real-time RT-PCR检测方法的建立第57-72页
  ·材料第57-58页
    ·临床标本第57页
    ·试剂第57页
    ·仪器和器材第57-58页
  ·方法第58-62页
    ·引物和探针的设计第58页
    ·重组质粒标准品的制备第58-59页
    ·病毒核酸(RNA)的提取第59页
    ·逆转录(RT)反应第59页
    ·常规 PCR第59-60页
    ·Real-time PCR第60页
    ·体外转录第60-61页
    ·一步Real-time RT-PCR 反应第61-62页
    ·Real-time RT-PCR 各项参数的评价第62页
    ·核酸提取方法回收率的分析第62页
    ·临床样本的检测第62页
  ·结果第62-69页
    ·引物与探针设计第62-63页
    ·质粒标准品的制备第63-64页
    ·重组质粒的双酶切鉴定、测序结果第64页
    ·重组质粒pcDNAⅡS2-116 的DNA 拷贝数确定第64页
    ·诺如病毒GGⅡ型常规RT-PCR 的检出限第64-65页
    ·Real-time RT-PCR第65-66页
    ·Real-time PCR 标准曲线的建立及其灵敏度第66-67页
    ·Real-time PCR 的特异性第67页
    ·Real-time PCR 检测的重复性和准确性第67-68页
    ·两步Real-time PCR 扩增效率的验证第68-69页
    ·核酸提取方法的回收率第69页
    ·临床腹泻粪便标本的检测第69页
  ·讨论第69-71页
  ·小结第71-72页
第4章 诺如病毒衣壳蛋白基因重组腺病毒的免疫活性研究第72-84页
  ·材料第72页
    ·菌种及毒种第72页
    ·细胞和实验动物第72页
    ·试剂第72页
    ·仪器设备第72页
  ·方法第72-75页
    ·重组腺病毒的扩增第72-73页
    ·动物免疫第73页
    ·间接 ELISA第73-74页
    ·免疫小鼠脾淋巴细胞的制备第74页
    ·小鼠肺灌洗液、肺肝肠匀浆标本、粪便的处理第74页
    ·Elispot(固相酶联免疫斑点技术)实验第74-75页
  ·结果第75-82页
    ·重组腺病毒的扩毒第75页
    ·重组腺病毒rvAdGII4免疫小鼠后血清抗体可诱导良好的体液免疫反应第75-78页
    ·重组腺病毒rvAdGII4免疫小鼠后可诱导黏膜免疫第78-81页
    ·重组腺病毒rvAdGII4免疫小鼠后可诱导细胞免疫第81-82页
  ·讨论第82-83页
  ·小结第83-84页
结论第84-85页
参考文献第85-94页
致谢第94-95页
作者简介第95页
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